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背景食道癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率一直处于上升状态。淋巴结转移是食管癌转移的重要途径,区域淋巴结转移会引起癌症复发、远端转移,从而使食管癌患者预后不佳。Wnt1诱导途径蛋白1(WISP1)是一种分泌型细胞外基质相关蛋白,过去的研究已经提示,该基因在多种癌症细胞呈异常表达,与癌症病人临床病理表现、生存预后有关。WISP1可以成为肿瘤诊断、治疗和预后的新靶点,但该基因在食管癌细胞中的表达情况及作用尚不清楚。本研究以WISP1基因为研究对象,研究该基因在食管癌细胞中的表达及其表达抑制后对食管癌细胞增殖及转移的影响,研究结果将为食管癌治疗靶点和预后生物标志物的选择提供新的研究策略。目的(1)研究WISP1基因在人食管癌细胞中的表达情况;(2)RNAi抑制WISP1基因表达对食管癌细胞增殖能力的影响;(3)RNAi抑制WISP1基因表达对食管癌细胞克隆形成的影响;(4)RNAi抑制WISP1基因表达对食管癌细胞细胞迁移的影响。方法(1)取正常食管上皮HET-1A细胞系和食管癌EC9706细胞系,实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组细胞中WISP1 mRNA的相对表达量;(2)设计WISP1基因的特异性shRNA靶点,构建WISP1基因shRNA慢病毒载体并侵染食管癌细胞,构建WISP1基因的抑制表达细胞株,采用qPCR方法检测各组转染细胞中WISP1的mRNA水平变化,以鉴定基因抑制效果;(3)MTT法检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果(1)qPCR结果提示食管癌细胞EC9706中WISP1 mRNA的相对表达量显著高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。(2)qPCR结果显示shRNA WISP78和WISP79干扰处理后细胞株中WISP1的mRNA的表达量明显低于对照NC组。(3)shRNA慢病毒载体转染后,WISP78和WISP79细胞抑制率达到30%,效果显著;表明该shRNA会对细胞的增殖能力产生影响。(4)细胞克隆形成实验:结果表明WISP1基因表达干扰组食管癌细胞在细胞的克隆形成方面比对照组有明显延缓。(5)划痕实验结果显示在12小时开始实验组比对照组细胞迁移速率明显减缓,而直至48小时对照组细胞几乎完全融合,WISP1表达干扰组食管癌细胞的迁移明显受到抑制。结论WISP1基因在食管癌细胞中高表达。构建的RNAi干扰载体可以抑制食管癌细胞WISP1基因mRNA的表达。抑制WISP1基因表达可抑制食管癌细胞的增殖、克隆形成和细胞迁移。