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第一部分沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990生长的影响目的:探讨沉默Matriptase对胰腺癌株SW1990体外生长的影响,并探讨其对胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法:根据Genbank中Matriptase的编码区基因序列NM021978.3及相关参考文献,合成特异性针对Matriptase的si RNA及与Matriptase无关的阴性对照si RNA,瞬时转染胰腺癌细胞株SW1990;实验分为4组:阴性对照组（A组）、12.5 n M（B组）、25 n M（C组）、50 n M Matriptase-si RNA组（D组）;利用real time PCR技术测定转染后24h各组细胞中Matriptase在m RNA水平上的相对表达量;Western blot技术检测转染后24 h各组细胞Matriptase在蛋白水平的相对表达量;明胶酶谱检测各组细胞在转染24 h后Matriptase酶活性及MMP-9表达量的变化,CCK-8检测各组细胞在转染24 h后细胞增殖能力的变化;划痕实验检测各组细胞在转染24 h后细胞迁移力的变化;Transwell侵袭实验检测各组细胞在转染24 h后细胞侵袭力的变化。Western blot检测各组细胞在转染24 h后u PA/pro-u PA、HGF、AKT、p-AKT、E-cadherin表达量的变化。结果:（1）胰腺癌细胞株SW1990、As PC-1中都有Matriptase的高表达,SW1990、As PC-1的蛋白表达量分别为（0.94±0.63）、（1.58±0.15）;胰腺癌细胞株Pa TU8988中无Matriptase的表达。（2）胰腺癌细胞株SW1990在转染NC、12.5 n M、25 n M、50 n M Matriptase-si RNA 24 h后,各组Matriptase m RNA水平分别为1、0.44±0.05、0.28±0.04、0.25±0.07;但Matriptase蛋白表达水平分别是0.74±0.06、0.49±0.04、0.34±0.01、0.24±0.05。（3）Matriptase-si RNA转染前后细胞增殖力的变化,各组的24 h的吸光度分别为0.62±0.01、0.62±0.03、0.37±0.05、0.33±0.05;48 h的吸光度分别为0.77±0.05、0.69±0.03、0.48±0.02、0.42±0.05（4）A组及C组划痕间距分别为0.061±0.013、0.368±0.014,可见C组细胞的迁移距离明显降低;而A组和C组穿膜细胞数分别是（416±1.3）与（109±2.8）,可见转染胰腺癌细胞株SW1990 Matriptase-si RNA后细胞的侵袭力明显降低。（5）Matriptase-si RNA转染前后Matriptase蛋白酶活性及MMP-9的变化,A、B、C、D各处理组的Matriptase酶活性分别1.50±0.16、1.21±0.27、0.64±0.16、0.62±0.03;MMP-9的活性分别为0.93±0.26、0.48±0.36、0.35±0.11、0.35±0.12。其中C组与D组的Matriptase酶活性及MMP-9活性明显降低（6）经转染处理后A、B、C、D组的u PA/pro-u PA的比值分别为3.52±0.04、1.11±0.11、0.15±0.06、0.12±0.08;p-AKT各组的蛋白表达量分别为0.91±0.16、0.37±0.20、0.27±0.17、0.09±0.06;AKT蛋白相对表达量分别为1.13±0.05、1.01±0.11、1.22±0.19、1.03±0.37;E-cadherin蛋白相对表达量分别为1.20±0.09、0.87±0.92、0.85±0.08、0.63±0.26;结果示转染Matriptase-si RNA后u PA/pro-u PA比值降低,p-AKT表达量减少,AKT及E-cadherin表达量无明显变化。结论:沉默Matriptase使细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显下降。其机制可能是抑制了Matriptase酶活性,导致pro-u PA的活化降低,进而导致MMP-9的活化、AKT的磷酸化减弱,最后细胞的增殖、迁移及侵袭下降。第二部分沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990移植瘤生长的影响目的:探讨沉默Matriptase对胰腺癌株移植瘤体内生长的影响,并探讨其在体内对胰腺癌细胞株移植瘤可能的作用机制。方法:（1）利用磷酸钙沉淀法制备慢病毒,并转导胰腺癌细胞株SW1990用于干扰Matriptase的表达,利用倒置荧光显微镜及流式细胞分析仪检测转染效果,流式细胞分选仪进行细胞分选,收集稳转细胞株;Western blot技术检测干扰效果。（2）建立胰腺癌皮下移植瘤模型:将4周的BALB/c雌性裸鼠分为两组,分别为空载体组（sh NC组）、转染组（sh MT1）,并监测小鼠的体重、肿瘤大小,待肿瘤体积长至500 mm3后,动物成像仪拍照。颈椎脱臼法处死小鼠,皮下剥离肿瘤,去除包膜,记录肿瘤的重量及体积。（3）将取下的肿瘤组织Western blot及免疫组化检测各组肿瘤组中Matriptase、MMP-9、E-cadherin量的变化。结果:（1）sh NC组在第7、14、21、28、35天的肿瘤体积分别为（2.236±0.024）mm3、（52.60±0.082）mm3、（130.4±0.023）mm3、（308.1±0.283）mm3、（568.2±0.048）mm3,sh MT1组在第7、14、21、28、35天的肿瘤体积分别为（2.197±0.035）mm3、（21.46±0.022）mm3、（78.61±0.012）mm3、（102.7±0.120）mm3、（150.8±0.036）mm3;sh NC组的肿瘤重量为0.96±0.27,抑瘤率为（0.0±0.0）%;sh MT1组的肿瘤重量为0.43±0.13,抑瘤率为（55.2±2.7）%,可以发现sh MT1组肿瘤体积及重量都明显降低。（2）sh NC组的Matriptase、MMP-9、E-cadherin的蛋白相对表达量分别为2.23±0.75、0.58±0.11、1.12±0.22;sh MT1组的Matriptase、MMP-9、E-cadherin的蛋白相对表达量分别为0.19±0.03、0.09±0.03、1.02±0.07,可发现sh MT1组中的MMP-9表达量明显降低,而E-cadherin的表达无显著差异。（3）sh NC组中Matriptase、MMP-9免疫反应阳性细胞指数分别为（85±6.78）%、（95±4.50）%;sh MT1组中Matriptase、MMP-9免疫反应阳性细胞指数分别为（15±2.45）%、（35±2.35）%,同样发现sh MT1组移植瘤组织中MMP-9表达量明显降低。而E-cadherin的表达在sh NC组及sh MT1组中无明显差异。结论:沉默Matriptase在裸鼠胰腺癌移植瘤体内可抑制肿瘤的生长与转移,其机制可能与MMP-9的下调有关。