功能性低聚糖的分离纯化和生理功能的研究

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本文主要研究了以Sephadex LH-20为分离介质,探索不同参数对纤维三糖~纤维六糖分离效果的影响,并对分离纯化的纤维三糖~纤维六糖进行红外光谱和质谱分析;研究了纤维低聚糖、低聚木糖对消化道内有益菌嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌的增殖作用,并探索了嗜酸乳杆菌、双歧杆菌代谢纤维低聚糖、低聚木糖的机理。研究结果如下:纤维低聚糖采用KTA Explorer层析系统进行分离纯化,以XK16/100为层析柱,以Sephadex LH-20为分离介质,以脱气超纯水为流动相,柱温为30℃,上样量为2mL(总糖浓度为33.77g/L),洗脱速度为0.3mL/min。在此分离条件下纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖可以实现较好的分离。通过二次分离,得到纤维低聚糖单一组分。纤维三糖、纤维四糖和纤维五糖的纯度分别为97.5%、91.88%和98.55%。纤维三糖~纤维六糖的红外光谱分析显示,糖类化合物的典型吸收峰主要包括:3600cm-1~3200cm-1是O-H的伸缩振动吸收峰;3000cm-1~2800cm-1是C-H、 C-H2的伸缩振动吸收峰;1600cm-1左右是糖类化合物中C=O的伸缩振动吸收峰;1158cm-1、1068cm-1是C-O的伸缩振动吸收峰;1029cm-1是C-O-C的伸缩振动吸收峰;897cm-1是吡喃型β–型C-H变角振动的特征吸收峰。纤维三糖~纤维六糖电喷雾电离质谱(ESI-MS)分析表明,样品的碎片形成主要有三种途径:单元糖环断裂,包括还原末端糖环和中间残基糖环;连接还原末端的糖苷键断裂,失去一个葡萄糖残基;丢失水分子。以葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖、纤维低聚糖、木糖、低聚木糖为碳源培养嗜酸乳杆菌,葡萄糖对嗜酸乳杆菌的增殖效果最好,其次是纤维二糖、纤维低聚糖和纤维三糖,菌体增殖倍数分别为5.84倍、5.04倍、3.48倍和3.2倍。嗜酸乳杆菌不能代谢木糖和低聚木糖。嗜酸乳杆菌的代谢产物主要是乳酸,其次是乙酸及少量的丙酸。以葡萄糖、木糖、低聚木糖、纤维二糖、纤维低聚糖为碳源,培养青春双歧杆菌,葡萄糖对青春双歧杆菌的增殖效果最好,其次是低聚木糖和木糖,菌体增殖倍数分别为17倍、8.7倍和5.5倍。青春双歧杆菌不能代谢纤维低聚糖。青春双歧杆菌的代谢产物主要是乙酸和乳酸,以及少量的丙酸。嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌是消化道内主要的有益菌,纤维低聚糖和低聚木糖进行复配,可以有效地促进嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌的增殖,维持消化道微生态平衡。
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