紫黄质脱环氧化酶在烟草中的过量表达和反义抑制研究

来源 :中国科学院植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunrise617
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该文利用过量表达和反义抑制技术获得两种转基因烟草植株,并用于研究紫黄质脱环氧化酶在叶黄素循环中的作用.首先我们从烟草中克隆了编码VDE酶的基因,分别以正向和反向插入到具有潮霉素抗性选择标记的双元载体pCAMBIA1310,构建了Tvde基因的过量表达载体pCBTO和反义抑制表达载体pCBTA.然后通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)介导法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)获得了过量表达和反义抑制两种转基因植株.PCR扩增潮霉抗性基因hpt和Southern杂交检测结果表明,Tvde基因已整合到转基因烟草的基因组中,外源基因在转基因烟草基因组中以1个烤贝的形式存在.VDE酶活性测定表明,在反义抑制转化体中VDE酶活性被抑制60﹪,而在过量表达转化中VDE酶活性提高了75﹪.通过色素的HPLC分析和荧火动力学测定结果表明,强光处理后,在反义抑制转化体和过量表达转化体中,Z的含量,DES,NPQ和Fv/Fm等数据说明转基因烟草中VDE含量与植物非学化学猝灭能力有直接关系,进而说明叶黄素循环具有热耗散的功能.
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