蛋鸡输卵管膨大部在自然发育过程中各阶段转录组变化情况研究

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鸡的输卵管是重要的繁殖器官,研究输卵管既有理论意义也有商业价值。而输卵管的膨大部,作为输卵管最长的一个组成部分,是鸡蛋形成过程中蛋清形成的部位,具有重要的研究价值。本论文旨在通过对输卵管膨大部在自然发育过程中转录组变化情况的研究,一方面探索影响输卵管膨大部细胞分化的分子机理,另一方面研究膨大部在蛋白形成期间主要的调控因子,为改良鸡蛋新鲜度奠定基础。本研究以白来航母鸡为研究对象,把从母鸡出生后输卵管的整个发育过程分为了五个阶段,分别是发育停滞阶段(D1, developmental stage1),细胞增殖前期(D2, developmental stage2),细胞增殖后期(D3, developmental stage3),细胞分化前期(D4, developmental stage4),产蛋期(L, laying stage),这五个阶段在本试验的研究群体中分别对应的周龄为7周龄,13周龄,16周龄,17周龄和20周龄。本研究在每个阶段选取了输卵管膨大部的样本用以提取总RNA,利用illumina HiSeq2000技术平台进行每个阶段的转录组变化研究。在输卵管发育的整个过程中,在膨大部一共检测到17935个转录本。在这些基因中,本研究通过分析将不同阶段之间差异表达的基因根据其表达模式分为了14类,并且对这些基因进行了功能聚类分析。通过聚类分析,在不同的类别中获得了不同的GO (Gene Ontology)条目。其中包括细胞增殖与调节(cell proliferation and regulation)、RNA代谢过程调节(regulation of RNA metabolic process)、血管发育(blood vessel development)、氨基酸转运(amino acid transport)等。结果统计,一共获得了473个与细胞发生过程相关的候选基因,而这些基因很可能是输卵管发育的重要候选基因。另外,本研究对一些具有代表性的候选基因进行了验证和进一步的研究,这几个基因包括Growth/differentiation factor8, Ovalbumin, HEP21protein以及一个新基因ENSGALG00000019851.通过qRT-PCR验证了RNA-seq的准确性,并对这些基因的潜在功能进行了探讨。其中Growth/differentiation factor8在鸡输卵管膨大部的生长发育过程中起到抑制的作用,Ovalbumin可以作为衡量输卵管发育阶段的一个标记物,HEP21protein和ENSGALG00000019851作为蛋清组成蛋白,也可能参与输卵管的发育。通过不同发育阶段之间差异表达基因的比较,本研究提供了一个参考基因库,从这个基因库中可以挑选出一些能够作为区分不同发育阶段的标记候选基因。总之,本试验获得的大量表达数据为蛋鸡输卵管膨大部在自然发育过程中的转录组表达情况提供了重要信息,丰富了细胞在输卵管发育过程中复制和分化机理的知识,为将来进一步的研究提供了数据支持。
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