目的：　　 优化新型纳米非病毒载体PCL-PEG-Chitosan和PEI600-CyD在体外与质粒的复合条件。评价这两种非病毒载体对于骨关节相关细胞的细胞毒性。研究其与质粒组成的复合物对于骨关节相关细胞的基因转染效率，并对此过程中质粒的运动情况和分布情况进行探索。为这些纳米非病毒基因输送体系进一步用于骨关节疾病的基因治疗给予参考。　　 方法：　　 1．在体外利用凝胶电泳方法确定非病毒载体与质粒复合的最小氮磷比（N/P）。　　 2．利用动态光散射粒径测量仪确定复合物在不同氮磷比、不同缓冲溶液体系下粒径的变化情况。　　 3．分别从健康雄性SD 大鼠的骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞（BMSCs），膝关节中分离得到滑膜细胞和软骨细胞。利用MTT实验，来确定非病毒载体PEI600-CyD 分别对于这三种细胞的细胞毒性。　　 4．将带有绿色荧光蛋白基因的质粒（pEGFP）同PCL-PEG-Chitosan和PEI600-CyD 进行复合后对细胞进行转染实验，然后利用流式细胞分析技术定量统计转染效率。　　 5．分别利用量子点和荧光素两种不同的标记方法对质粒进行标记，并利用激光共聚焦显微镜观察复合物转染细胞后，质粒在细胞中的分布情况。　　 结果：　　 1．凝胶电泳结果显示非病毒载体PCL-PEG-Chitosan 与pEGFP 复合的最小氮磷比为4：1，同时PCL-Chitosan 与pEGFP 复合的最小氮磷比也为4：1，而Chitosan 与pEGFP 复合的最小氮磷比则为1：1。　　 2．动态光散射实验结果显示非病毒载体PCL-PEG-Chitosan 与pEGFP复合而成的复合物的粒径随着氮磷比的增大而减小，并且这些复合物在NaAc 缓冲体系和DMEM 缓冲体系中，粒径基本一致，相对稳定。　　 3． MTT 实验显示，非病毒载体PEI600-CyD 对于原代软骨细胞，原代滑膜细胞，原代骨髓间充质干细胞的细胞毒性要明显小于非病毒载体PEI-25kDa。　　 4．利用荧光显微镜观察发现，PCL-PEG-Chitosan 同pEGFP 在氮磷比为32 时组成的复合物对于293t 细胞的转染效率明显不及Lipo2000。　　 5．利用流式细胞仪检测发现，PEI600-CyD 的对于原代骨髓间充质干细胞和原代软骨细胞的转染效率要明显高于Lipo2000，而Lipo2000对于原代滑膜细胞的转染效率要明显高于PEI600-CyD。　　 6．利用量子点标记技术和荧光素标记技术分别标记pEGFP 后发现，利用PEI600-CyD 转染骨髓间充质干细胞后，质粒在细胞核内分布的数量要高于Lipo2000。　　 结论：　　 1．聚己内酯（polycaprolactone，PCL）修饰会使得壳聚糖（Chitosan）对于pEGFP的复合能力有所减弱，提高最低复合氮磷比。而聚乙二醇（poly(ethylene glycol)，PEG）修饰对于最低复合氮磷比则没有影响。　　 2．DMEM 缓冲体系对于PCL-PEG-Chitosan与pEGFP的复合物的粒径基本没有影响。　　 3．PEI600-CyD的细胞毒性较之PEI-25kDa要明显降低，其转染效率在原代骨髓间充质干细胞和原代软骨细胞上要明显高于Lipo2000。　　 4．PEI600-CyD较之Lipo2000，使得pEGFP更加容易进入骨髓间充质干细胞的细胞核。