小麦抗赤霉病基因Fhb5的精细定位及BAC重叠群的构建

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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum Schwabe)是一组能产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)毒素的真菌复合体,是造成世界范围内赤霉病害流行的主要菌种,导致小麦产量的降低,并且严重影响小麦品质。提高小麦自身的抗病性是最有效的一种对抗赤霉病的方法。本实验室研究前期从地方品种望水白中发现一个主效抗赤霉病侵入位点,并且将其定位到5A染色体短臂上,通过精细定位,将其定位到遗传距离大约0.017-0.036 cM的两个标记GWM415与WGRB0142之间。在此基础之上,通过进一步筛选重组体并结合历年来纯合重组体表型以及已知序列信息,将其位置定位到遗传距离为 0.056-0.057 cM的WGRB0390-GWM415两个标记之间。利用 Fhb5 区间内的标记 BARC117、GWM304、GWM415、WGRB0269、WGRB0914、WGRB0817、WGRB0222、WGRB0018、WGRB0286和BARC180,对PH691和绵阳99-323两个背景的Fhb5次级F2群体进行重组体筛选,由于区间遗传距离已经很小且位于着丝粒重组冷点区域,结果并没有筛选到新的重组类型。在此背景之下,以标记GWM415为中心往两侧设计标记筛选了望水白BAC文库,进行染色体步移,构建了抗病区间Fhb5的望水白BAC重叠群,共获得10个阳性单克隆,通过筛选获得的单克隆序列与TGAC数据库中大的scaffold拼接,共获得大约1000kb以上物理序列,这为克隆Fhb5基因奠定了基础。
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