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研究背景及目的重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是由CD4+T细胞依赖与补体参与,抗烟碱型乙酰胆碱受体抗体介导,针对神经肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor, AChR)进行性破坏的一种自身免疫性疾病。实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)是模拟人类重症肌无力发病的动物模型。其临床表现、电生理学及免疫学与人类重症肌无力颇为相似,是研究人类重症肌无力的一种可靠动物模型。他汀类药物是公认的降低血浆低密度脂蛋白和胆固醇水平的药物,广泛用于心脑血管疾病的治疗。阿托伐他汀作为羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂,其免疫调节功能主要是通过抑制甲羟戊酸(mevanolate, MVA)的生物合成,减少下游类异戊二烯焦磷酸法尼酯(farnesyl pyrophosphate, FPP)和焦磷酸栊牛儿基栊牛儿基酯(geranylgeranyl pyrophosphate, GGPP)的生成,进而抑制小GTP结合蛋白的活化和在细胞膜的锚定,阻断Rho/Rock通路来实现的[4-6]。他汀类药物的免疫调节作用逐渐被人们所认识,已被用于研究治疗各种自身免疫性疾病动物模型,包括：实验性自身免疫性神经炎,实验性自身免疫性脑脊髓炎,实验性自身免疫性葡萄膜炎,实验性自身免疫性心肌炎等[7-12]。尚未见他汀类药物治疗EAMG的研究报道。国际上有文献报道：他汀类药物可能加重人类MG,但具体机制尚不清[13-15]。本实验的目的在于探讨小剂量阿托伐他汀对于EAMG的免疫调节作用。材料与实验方法1.1材料1.1.1实验动物：雌性Lewis大鼠,6-8周龄,体质量140-160g。1.1.2主要试剂：抗原为人工合成鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段。1.2实验方法1.2.1EAMG模型的诱导和临床评分于每只大鼠双后足垫皮下给予200μL抗原乳液(含50μg R97-116肽,1mgH37Ra结核杆菌,不完全弗氏佐剂)。并于免疫后第11d进行大鼠背部脊柱两侧皮下加强免疫1次。采用双盲评估法,隔天评测大鼠肌力并记录体质量。肌力测量采用Lennon临床评分。1.2.2阿托伐他汀治疗EAMG将10只Lewis大鼠随机分成阿托伐他汀治疗组(1mg/kg)和对照组(溶剂DMSO)。于EAMG大鼠发病初期开始隔日给予阿托伐他汀腹腔注射治疗,直至大鼠发病高峰期第49d。1.2.3免疫组化检测大鼠胸腺中Foxp3的表达于发病高峰期处死大鼠,取大鼠胸腺,石蜡包埋切片,免疫组化方法检测大鼠胸腺Foxp3的表达。1.2.4淋巴结单个核细胞(mononuclear cells, MNC)悬液的制备无菌条件下,取腹股沟淋巴结,在盛有细胞滤器的培养皿中研磨淋巴结,制备淋巴结MNC悬液。1.2.5CCK-8细胞增殖实验取96孔板,每孔加入4×105个淋巴结MNC,并分为R97-116刺激组和对照组。细胞培养64h后,吸取每孔细胞培养上清液,-20℃保存,择日检测细胞因子,然后每孔加入10μL CCK-8,4h后用酶标仪测定其光密度值(OD值)。1.2.6ELISA检测细胞培养上清液细胞因子IL-4的表达用R97-116刺激淋巴结MNC培养64小时后,吸取培养上清液。采用IL-4双抗体夹心法ELISA试剂盒检测培养上清液中细胞因子IL-4的表达水平。1.2.7ELISA检测大鼠血清抗R97-116抗体于发病高峰期处死大鼠,取心脏血,离心取血清,采用ELISA测血清中抗R97-116抗体的含量。1.3统计学处理采用spss17.0统计软件分析,对两组标本进行独立样本t检验,结果以均值±标准差表示,p<0.05为差异有统计学意义。结果：1阿托伐他汀改善EAMG大鼠临床症状2阿托伐他汀上调EAMG大鼠胸腺Foxp3的表达3阿托伐他汀对细胞增殖实验的影响在PBS和R97-116刺激下的两种情况下,阿托伐他汀治疗组的MNC OD值均低于对照组,虽无统计学意义,但趋势是明显的。4阿托伐汀增加EAMG大鼠淋巴结单个核细胞培养上清液中IL-4的水平5阿托伐他汀降低EAMG大鼠血清抗R97-116抗体水平结论：阿托伐他汀通过上调Treg和Th2型细胞因子IL-4的水平,从而降低血清中抗R97-116抗体水平,缓解EAMG病情。