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目的通过研究不同浓度的纳米银对C6胶质瘤细胞的作用,包括毒性、细胞形态、凋亡、细胞周期等相关实验检测,探讨纳米银对C6胶质瘤细胞的杀伤作用。方法1.利用CCK-8检测法评估纳米银对C6胶质瘤细胞的毒性作用:根据加入C6胶质瘤细胞培养板中的纳米银浓度不同分为空白对照组,0.1mg/ml组,0.2mg/ml组,0.3mg/ml组,0.4mg/ml组,0.5mg/ml组,0.6mg/ml组,分别培养24h和48h,加入CCK-8,使用酶联免疫检测光吸收值,确定C6胶质瘤细胞增殖率。2.光学镜下观察纳米银对C6胶质瘤细胞的形态作用:根据加入C6胶质瘤细胞培养板中的纳米银浓度不同分为空白对照组,0.2mg/ml组,0.4mg/ml组,0.6mg/ml组,0.8mg/ml组,1.0mg/ml组,培养24h后,在光学显微镜下观察C6胶质瘤细胞的生长形态和生长密度。3.通过Annexin V和碘化丙啶(PI)双染检测手段观测C6细胞的细胞膜受损情况:根据加入C6胶质瘤细胞培养板中的纳米银浓度不同分为:0.025mg/ml组,0.05mg/ml组,0.1mg/ml组,0.2mg/ml组,空白对照组。培养24h后,加入FITC Annexin V和Propidium Iodide。在1h内进行双变量流式细胞仪检测荧光表达强度和分析数据。4.利用流式细胞仪检测纳米银对细胞周期的影响:根据加入C6胶质瘤细胞培养板中的纳米银浓度不同分为:0.2mg/ml组,0.4mg/ml组,0.6mg/ml组,0.8mg/ml组,1.0mg/ml组,空白对照组。培养24h后,用流式细胞仪进行检测。结果1.不同浓度的纳米银处理C6胶质瘤细胞24h和48h后,细胞增殖率明显下降,随着纳米银浓度的上升和作用时间增加,C6胶质瘤细胞的生存活力逐渐下降,说明了纳米银的毒性作用具有浓度和时间依赖性。2.经过纳米银的作用后,C6胶质瘤细胞间的融合联系稀疏,没有聚集生长,细胞密度明显下降,呈散在分布生长,同时随着纳米银浓度的增加其细胞密度不断下降;细胞形态由长梭形,皱缩成了小圆形,细胞形态不明显,细胞内可见黑色颗粒,同时较少能观察到增殖的分裂细胞;且C6胶质瘤细胞十分容易从培养板底层脱落,悬浮细胞数量增加,其贴壁生长能力明显下降。3.使用20nm的不同浓度纳米银检测培养24h的情况发现空白对照组的凋亡率是6.95%,0.025mg/ml组的是19.08%,0.05mg/ml组的是33%,0.1mg/ml组的是59.18%,0.2mg/ml组的是27.22%。不同浓度纳米银对细胞凋亡的影响存在浓度依赖性,浓度越高,诱导产生的凋亡率越高。4.利用流式细胞仪检测细胞纳米银对细胞周期的影响:实验结果显示,处于S期的细胞数目增加的同时,G0/G1期的细胞数目减少,但不管在什么浓度的实验情况下,G2/M期的细胞数量相比基本没有太大的变化,受损的细胞大量阻滞主要在S期。结论本研究通过不同浓度纳米银作用于C6胶质瘤细胞的形态作用观察,可知纳米银对C6胶质瘤细胞有毒性作用,同时纳米银对C6胶质瘤细胞的毒性具有浓度依赖性;随着纳米银浓度的上升和作用时间增加,C6胶质瘤细胞的生存活力逐渐下降,纳米银对C6胶质瘤细胞的抑制作用呈现出浓度依赖性和时间依赖性;不同浓度纳米银对细胞凋亡的影响存在浓度依赖性,浓度越高,诱导产生的凋亡率越高,研究表明纳米银诱导C6细胞阻滞主要发生在S期。