HMGB1在脊柱椎间盘退变中软骨终板的表达和意义

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目的:研究高迁移率蛋白1(High mobility group box-1,HMGB1)在退变脊柱椎间盘软骨终板中的表达和意义。方法:1.建立脊柱椎间盘退变动物模型:以日本大耳兔为研究对象。通过切除关节突关节和棘突破坏脊柱后柱稳定性,以限定型号和深度的穿刺针损伤纤维环全层两种方法,建立脊柱腰椎间盘退变动物模型。2.标本获取:不同时间段处死兔子,完整取出手术干预椎间盘作为实验组、取未行手术干预下胸段椎间盘为对照组。3.验证脊柱椎间盘退变:以X-ray、MRI从影像学角度验证椎间盘退变;以组织切片HE染色从组织学角度验证椎间盘退变;以ELISA检测椎间盘组织中Ⅱ型胶原蛋白、蛋白多聚糖的含量从分子学角度验证椎间盘退变。4.目的蛋白检测:以免疫组化方法对椎间盘组织中HMGB1行定性检测并对免疫组化切片行图像分析做半定量分析;以免疫组化方法对NF-κB的表达行定性检测、半定量分析。结果:1.与对照组相比,实验组(包括前路针刺纤维环全层组和后路破坏脊柱稳定性组)受干预椎间盘术后均出现了不同程度的高度丢失、水分丢失、软骨终板钙化、临近椎体骨赘形成、纤维环和髓核结构紊乱、细胞减少;Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多聚糖的含量均较对照组减少,且前路组Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多聚糖含量减少比后路组明显。2.对照组和实验组兔椎间盘组织中均表达HMGB1,而且HMGB1仅表达于软骨终板的软骨细胞和软骨终板血管芽中,并不表达于纤维环和髓核组织。随着退变的加重,HMGB1表达有增高的趋势。3.对照组和实验组兔椎间盘组织中均表达NF-κB,而且NF-κB表达于软骨终板以及髓核组织。随着退变的加重,NF-κB表达有下降的趋势。结论:1.前路针刺纤维环全层和后路破坏脊柱后柱稳定性均能引起兔相应节段椎间盘发生退变改变;2.在相同的时间内,术后前路针刺纤维环全层引起的椎间盘退变改变较后路破坏脊柱稳定性者重;3.高迁移率蛋白-1(High Mobility Group Protein Box-1,HMGB-1)在对照组和实验组的兔椎间盘中均有表达,且仅表达于软骨终板软骨细胞和血管芽;4.实验组兔椎间盘软骨终板中HMGB1表达较对照组兔椎间盘升高,且有随着退变加重,表达升高的趋势;5.HMGB-1可能在维持兔椎间盘退变的慢性炎症性反应中起到作用,而HMGB1在兔椎间盘退变中通过激活NF-κB经典途径发挥其致炎作用的可能性不大。
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