降解—示踪功能质粒的构建及其性能研究

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本研究通过基因克隆技术,将绿色荧光蛋白基因(gfp)和阿特拉津脱氯水解酶基因(atzA)重组,构建降解-示踪功能质粒,并对转化获得的基因工程菌绿色荧光蛋白表达及阿特拉津降解能力进行评价;通过基因水平迁移实验,考察重组质粒在大肠杆菌与活性污泥土著菌之间的迁移能力及影响因素;以含重组质粒的基因工程菌为生物强化菌株,运行膜曝气生物膜反应器,考察溶解氧、水力停留时间、进水COD浓度对阿特拉津降解效率及常规污染物去除效果的影响,并检测生物膜中菌群结构变化情况。结果表明,将gfp和atzA基因克隆至质粒载体pUC18所获得的重组质粒,经检测含有atzA基因,具有氨苄青霉素抗性,并可表达绿色荧光蛋白;携带重组质粒的基因工程菌具有阿特拉津降解活性,且可在活性污泥中产生绿色荧光现象。基因水平迁移实验中,相同条件下的滤膜杂交的迁移频率高于液相杂交,且延长细胞接触时间可提高质粒迁移频率;液相杂交实验中,提高细胞密度、增加细胞接触时间和接触频率有利于提高质粒迁移频率;质粒迁移频率因受体细胞和质粒载体性质影响,重组质粒的迁移能力高于质粒pACYC184;经检测,分离纯化后的迁移结合子具有氨苄青霉素抗性,绿色荧光性及阿特拉津降解特性。膜曝气生物反应器中,提高进水COD浓度、水力停留时间、溶解氧浓度有利于提高基因工程菌对阿特拉津的降解效率;随着反应器运行时间的增加,基因工程菌逐渐包埋于生物膜内侧生长,生物膜微生物菌群逐渐多样化。
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