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抑癌基因甲基化失活已成为白血病发生的重要机制之一。寻找新的在白血病细胞中甲基化失活的基因已成为目前白血病研究中的一个重要任务。于力通过甲基化敏感性限制性路标基因组扫描技术技术比较了来源于正常和白血病小鼠的脾脏细胞DNA甲基化模式,发现了50个DNA启动子甲基化的白血病相关基因。由于小鼠基因组与人类有较高的同源性,这些基因对人类白血病的研究具有很高的价值。本实验选取了其中的4个:SEMA6A、B56、IGSF4和SLIT2,对其进行进一步筛选,希望从中发现在人类白血病也存在DNA启动子甲基化的基因。 为探讨SEMA6A、B56、IGSF4和SLIT2在人类白血病是否存在甲基化失活,本研究应用RT-PCR检测了这4个基因在HL60、U937和Molt4等3种常见的白血病细胞系的表达情况;应用5-杂氮脱氧胞嘧啶处理上述白血病细胞系,观察去甲基化处理对失活基因的影响;应用生物信息学技术分析了IGSF4基因的表达谱,应用RT-PCR检测了IGSF4基因在正常人骨髓和白血病患者骨髓中的表达情况;应用MS-PCR检测了以上3种白血病细胞系、正常人和白血病患者骨髓中IGSF4基因DNA启动子甲基化情况。 结果显示:① B56在所检测的3种白血病细胞系中均表达:SEMA6A在HL60细胞不表达,SLIT2在3种白血病细胞系中均不表达,但去甲基化处理不能诱导SEMA6A和SLIT2恢复表达;IGSF4在3种白血病解放军总医院军医进修学院中文摘要博士论文细胞系中均不表达,去甲基化处理后均恢复表达。提示,IGSF4最有可能在白血病细胞中存在启动子甲基化。②生物信息学分析显示,IGSF4基因在包括骨髓、肌肉、神经、脾、肝等多种正常组织和肿瘤组织中表达,提示IGsF4基因是生理功能非常重要的基因。@l GSF4基因在正常人骨髓均表达,在白血病患者中IGSF4基因表达率明显下降,急性淋巴细胞白血病与急性髓细胞白血病的表达无显著差异。提示IGSF4基因的失活可能与白血病的发生密切相关。④MS一CR检测显示,所有这3种白血病细胞IGSF4基因DNA启动子均存在甲基化,证实了IGSF4基因在白血病细胞中的失活是由于启动子区甲基化。在白血病患者中,IGSF4基因启动子甲基化的发生率为48%,急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病无显著差异,初治组和难治、复发组无显著差异,提示IGsF4基因的甲基化是白血病发生过程中的一个普遍事件,与预后无关。