水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)感染水貂而引起的自身免疫系统功能紊乱，并发自身免疫的慢性、传染性疾病。在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失，由于现在还没有有效疫苗用于该病的防控，只能通过检测淘汰机制来净化水貂养殖场。
　　为研究AMDV的流行情况及有效的净化水貂养殖场，建立了一种基于SYBRGreenII的实时荧光定量PCR方法。根据AMDV基因组VP2基因内的保守区域设计了一对特异性引物，且通过试验优化了相关的反应条件。结果显示，本研究所建立检测方法的敏感性、特异性及重复性均良好，为AMDV流行病学研究及水貂养殖场的净化提供技术支持。
　　为探索AMDV的致病机理，以CrFK细胞为研究对象，检测了AMDV-G株感染CrFK细胞后的细胞活性、细胞形态学变化及凋亡率。试验结果显示，AMDV-G株的感染可显著抑制CrFK细胞活性，且与病毒感染滴度和感染时间呈正相关；利用AO/EB双染法观察CrFK细胞感染AMDV-G株后的形态学的变化，结果表明，AMDV-G株感染后，细胞出现核内染色质固缩、细胞核皱缩和碎裂；使用流式细胞术检测AMDV-G株感染CrFK细胞后对凋亡率的影响，结果表明CrFK细胞的凋亡率与病毒感染时间呈现正相关，明确了CrFK细胞被AMDV-G株感染后发生了凋亡。
　　对AMDV诱导细胞凋亡的信号通路进行了初步探索。通过检测Caspase活性发现AMDV-G株感染CrFK细胞后Caspase-8的活化程度没有显著变化，Caspase-3和Caspase-9的活性明显增加，结果显示，AMDV-G株可通过活化Caspase-9来诱导细胞凋亡的发生。AMDV-G株感染CrFK细胞后，通过实时荧光定量PCR相对定量法检测死亡受体通路中起始分子Caspase-8、Fas及其配体FasL，线粒体通路中起始分子Caspase-9、促凋亡蛋白Bax、CytC及执行分子Caspase-3的mRNA相对表达水平变化。结果显示，AMDV-G株感染CrFK细胞60h内，Caspase-8、Fas及其配体FasL的表达情况未发生明显变化，促凋亡蛋白Bax、CytC及Caspase-9表达量随感染时间的延长显著升高。Westernblot检测结果显示，AMDV-G株感染对CrFK细胞内Caspase-8蛋白的表达量没有显著影响，但能够明显促进Caspase-9蛋白的表达。荧光倒置显微镜显示线粒体膜电(?ψm)发生去极化，并且发生去极化的细胞数随着感染时间的延长而逐渐增多。上述结果表明，AMDV可以通过线粒体通路诱导CrFK细胞凋亡。
　　本研究为进一步探索AMDV的致病机制提供理论依据。