Bt抗虫棉新品系毒蛋白表达差异分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhiyouyiren
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棉铃虫是棉花生长发育过程中的主要害虫,棉花整个生育期均受其危害并造成减产。在抗虫棉应用前,主要通过使用化学农药来防治虫害,但过度使用化学农药易破坏自然生态环境。转基因技术的开发与应用为培育高产抗逆抗虫新品种提供新的途径与方法。转Bt基因抗虫棉成为防治棉花虫害最有效的措施。随着抗虫棉的应用,人们发现转Bt基因抗虫棉间的抗虫性存在较大差异。为了研究抗虫棉抗虫差异性原因,本研究以23个抗虫棉品系为材料进行分析。主要研究结果如下:  1.生物测定结果表明,23个试验品系的幼虫校正死亡率差异显著。13个品系的抗性级别为感;1个品系的抗性级别为中抗;9个品系的抗性级别为抗。  2.以卡那霉素涂抹、Bt-Cry1 Ab/Ac试纸条检测、PCR分析对23个抗虫棉品系进行了检测,发现各试验品系及阳性对照33B的均为卡那阳性株,即含有卡那抗性基因;卡那阳性株种子的试纸条上均检测到质控线和检测线,即表明各品系含有BtCry1Ac基因;进一步PCR分析均能到一条301bp的条带,表明Bt基因在供试材料中整合并稳定遗传。  3.对供试材料进行Southern blot检测和Bt基因全长序列分析发现各材料Bt基因均为单拷贝且碱基序列一致,未发生突变。  4.Bt因的相对实时定量结果表明,试验品系及各组织器官间的Bt基因相对表达量差异极大,各试验品系基本以花期叶片的Bt基因相对表达量最高,而新棉33B则以花期花的Bt因相对表达量最高。  5.通过检测试验品系和新棉33B的叶、小蕾、花和小铃在2013~2015年的蕾期、花期和铃期的Bt蛋白含量发现,不同抗虫棉品系的Bt蛋白表达量差异显著;抗虫棉组织器官的Bt蛋白表达量在不同生育时期差异性显著,具有时空差异性。对不同年份间抗虫棉Bt蛋白含量进行相关性分析发现,两年间的Bt蛋白表达趋势基本一致,相关系数为0.8407;但不同器官在两年间的Bt蛋白表达趋势显著不同,相关系数介于0.0909~0.8159,以蕾期蕾和花期叶、花的相关趋势最小。同时,抗虫棉遗传背景对Bt蛋白表达也具有一定影响。  6.幼虫死亡率与Bt蛋白的相关性系数为0.7130,与Bt基因的相对表达量的相关系数为0.1745,表明Bt蛋白的表达含量越高,抗虫棉的抗虫性越高,而mRNA则与抗虫棉抗虫性的相关性不一致。Bt蛋白含量与Bt基因的相对表达量间的相关性较小甚至为负相关,相关系数则介于-0.3659~0.2542。表明Bt基因在转录后受到调控,影响了Bt蛋白的表达。  由本研究可知,抗虫棉Bt基因可能在转录后期受到调控,进而影响Bt蛋白表达。遗传背景对Bt蛋白的表达也产生了一定影响,且可能与环境存在互作。Bt蛋白含量与抗虫性呈正相关关系,前者含量越高抗虫棉的抗虫性越好。
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