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本实验主要对健康家鸭、家鸡、乌鸡和鸽子这四种家禽的血清免疫复合物进行研究。采用PEG沉淀法提取家禽血清中的免疫复合物,利用SDS-PAGE分析,比较不同PEG沉淀次数的血清沉淀样品,从而得到真正不溶于该浓度血清的免疫复合物,实验证明经过一次PEG沉淀后就能较好的得到家禽血清中的免疫复合物。在检测家禽血清免疫复合物含量的实验中,将所得到的免疫复合物沉淀溶解于0.01mol/L的NaOH中,利用分光光度计在波长450nm下测定其吸光度。根据人血清IgG标准曲线的回归方程换算出家禽血清免疫复合物的相对含量。实验结果表明四种家禽在2%PEG和3.5%PEG两种条件下,其含量均为家鸭>家鸡>乌鸡>鸽子。统计学分析表明,在同一PEG浓度处理下,不同家禽血清免疫复合物中的含量均有显著差异。而在不同PEG浓度处理下,同一家禽血清免疫复合物含量也均有显著差异,均为在3.5%PEG处理组显著的大于2%PEG处理组的。 采用SDS-PAGE分析家禽血清免疫复合物中的抗体成分,在电泳图谱中,对照蛋白Marker,可以看出家鸡和乌鸡明显存在IgG和IgM的重链和轻链的带型。而家鸭和鸽子在蛋白Marker 31KD的条带以下,都只存在一个条带,至于究竟是IgG还是IgM的轻链,以下的Dot-ELISA实验证实其应为IgG类抗体轻链的带型。另外,电泳图谱还表明,四种家禽血清免疫复合物的电泳条带有一定差异,而同属鸡形目的家鸡和乌鸡之间条带差异较小。 进一步用Dot-ELISA实验检测家禽血清免疫复合物,在Dot-ELISA实验中,确定了最适包被时间为60min,最适酶标抗抗体工作浓度为1:500。家鸡血清免疫复合物中的抗体效价为1:1024,乌鸡的为1:256。由Dot-ELISA的实验结果显示,四种家禽2%PEG和3.5%PEG沉淀样品均能与HRP—兔抗鸡IgG发生特异性反应,说明2%PEG和3.5%PEG确能沉淀血清免疫复合物。同时也证明家鸭和鸽子血清免疫复合物中的抗体成分应为IgG。 综上所述,本实验采用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取家禽血清免疫复合物,并检测其含量。采用SDS-PAGE和Dot-ELISA技术对常见的四种家禽血清免疫复合物做一初步研究,为从免疫学角度探讨家禽疾病的诊断和治疗打下理论基础。