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目的在细胞水平研究丙基硫氧嘧啶(PTU)对T4干预下人Hep G2细胞(模拟在甲亢环境下)的损伤机制,并探讨异甘草酸镁(Mg IG)对丙基硫氧嘧啶诱导的人Hep G2细胞损伤的保护作用。方法1、体外培养Hep G2细胞于100n M浓度的T4干预环境中,在含有PTU 0、75、150、300、600、1200、2400μg/ml一系列浓度培养基分别孵育不同的时间,利用过氧化氢(H2O2)体外诱导肝细胞损伤作为阳性对照,采用MTT比色法及LDH法检测细胞增殖及细胞毒性情况,并测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性,得到最佳PTU诱导Hep G2细胞损伤浓度,建立PTU诱导的体外甲亢肝细胞损伤模型。2、将Hep G2细胞分成对照组、阳性对照组、PTU损伤组、Mg IG保护组,Hep G2细胞贴壁后,阳性对照组用H2O2诱导损伤,PTU损伤组和保护组则以PTU最佳损伤浓度预处理,8h后弃原培养液,Mg IG保护组加入5.0mg/ml Mg IG培养液中孵育24小时,其他组别补充等体积培养液。采用生化分析仪检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,试剂盒测定细胞胞浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量,探讨异甘草酸镁对PTU致肝损伤的保护作用。3、以PTU损伤模型作为研究对象,利用免疫印记法(Western blot)检测细胞中凋亡相关蛋白Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达,c-Jun氨基末端激酶(JNK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)及其磷酸化形式蛋白的表达。结果1、PTU对Hep G2细胞的损伤作用随剂量的增加和时间的增长而增强,在PTU浓度为600μg/ml,作用时间8h时对Hep G2细胞的抑制率为55.35±0.45%,死亡率为49.16±0.49%,培养液上清中ALT和AST水平较正常组明显升高(P<0.05)。2、异甘草酸镁预处理后,与损伤组相比,异甘草酸镁能显著提高细胞生存率;降低Hep G-2细胞培养液上清中ALT和AST水平(P<0.05),;降低细胞内MDA水平(P<0.05),同时增高细胞内SOD的活性和GSH的含量(P<0.05)。3、Western blot结果显示,PTU能升高Hep G-2细胞JNK、P38及其磷酸化蛋白的表达,与损伤组相比,异甘草酸镁保护组中的Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论1.建立PTU致甲亢Hep G2细胞损伤模型的最佳干预浓度和时间分别为600μg/ml,8h;2.PTU致肝损伤的机制可能与JNK、p38MAPK通路的激活有关;3.异甘草酸镁对PTU致Hep G2细胞损伤具有明显的保护作用。