阿勒泰羊角质量及镇静催眠和解热镇痛作用评价

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阿勒泰羊是新疆维吾尔自治区重要的特色羊品种,在阿勒泰地区其资源丰富。目前,对于阿勒泰羊的开发及应用大多集中在羊肉和羊油方面,对于羊角的质量以及药理作用探讨较少。因角壳与角塞在化学成分上存在较大差异,且角类药材大多具有镇静催眠、解热镇痛等药理活性,故本论文将阿勒泰羊角分成阿勒泰羊角壳及角塞,对阿勒泰羊角壳及其角塞开展质量评价,并对二者的镇静催眠及解热镇痛作用进行了研究,以期为阿勒泰羊角的资源开发利用奠定基础。主要研究内容如下:1.阿勒泰羊角壳及角塞质量评价收集阿勒泰羊角样品15批,将阿勒泰羊角壳与角塞分离。采用《中华人民共和国药典》2020版四部通则的相关方法对阿勒泰羊角壳与角塞分别进行质量评价,为阿勒泰羊角质量标准建立奠定基础。实验对阿勒泰羊角壳与角塞的性状进行了描述:阿勒泰羊角壳大而弯曲,有的成螺旋形角;长度一般在14~26cm左右,角基直径一般在4~7cm左右,表面呈黄白色、蜡黄色或灰黑色;角壳外表面有许多纵线纹或裂纹,有的可见清晰波状环脊;质坚硬,气微,味淡。角塞镶嵌角壳中,其长度一般在7~17cm左右,直径一般在3~5cm左右,表面呈黄白色、蜡黄色或灰黑色,呈实心,略有空洞,质坚硬,有羊膻味。基于氨基酸类成分建立了二者的薄层鉴别方法,其最优薄层条件为:氨基酸混合对照品3μL,阿勒泰羊角壳5μL,阿勒泰羊角塞7μL点于烟台硅胶薄层板,以正丁醇-冰醋酸-水(5:4:1)为展开剂,茚三酮试剂显色,在105℃加热至斑点显色清晰。水分检查结果显示,阿勒泰羊角壳含水量在6.00%~8.18%之间,角塞含水量在7.48%~11.49%之间;在该水分情况下,角壳和角塞均未见霉变。阿勒泰羊角壳总灰分含量在0.43%~1.24%之间,酸不溶性灰分含量在0.01%~0.38%之间;角塞总灰分含量在46.96%~58.92%之间,酸不溶性灰分含量在7.03%~18.00%之间;无论总灰分还是酸不溶性灰分,角塞明显高于角壳。重金属及有害元素检查结果显示,阿勒泰羊角壳铅残留量在0.0250~0.3247 mg/kg之间,镉在0.0003~0.0116 mg/kg之间,总砷在0.0368~0.1051 mg/kg之间,总汞在0.0092~0.0262mg/kg之间;角塞铅残留量在0.2988~0.6120 mg/kg之间,镉在0.0008~0.0050 mg/kg之间,总砷在0.0331~0.1425 mg/kg之间,总汞在0.0082~0.0356 mg/kg之间;角塞中铅含量明显高于角壳,二者其它重金属及有害元素含量差异不明显。羊角壳水溶性浸出物含量在1.67%~2.61%之间,角塞含量在2.61%~9.99%之间;角塞明显高于角壳。羊角壳醇溶性浸出物(70%乙醇)含量在1.07%~3.37%之间,角塞醇溶性浸出物(70%乙醇)含量在1.91%~7.57%之间;角塞明显高于角壳。利用柱前衍生RP-HPLC法测定了阿勒泰羊角壳及角塞中的水解氨基酸种类与含量,发现二者的氨基酸丰富而全面,测定的21种氨基酸均含有,角壳的水解氨基酸中甲硫氨酸含量最高,角塞的水解氨基酸中酪氨酸含量最高,15批羊角壳样品的平均含量为3.44%,角塞中平均含量为1.14%;阿勒泰羊角壳水解氨基酸明显高于其角塞,但角塞中的甘氨酸、组氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸含量明显高于羊角壳。上述结果为阿勒泰羊角质量标准的建立奠定了基础。2.阿勒泰羊角壳及角塞药理活性评价(1)镇静催眠作用小鼠镇静催眠实验结果显示,阿勒泰羊角壳及角塞均能与5-羟色胺(5-HT)前体物质5-羟基色氨酸(5-HTP)发挥协同作用使小鼠海马区5-HT水平增高,提高小鼠睡眠质量;并能抑制由对氯苯丙胺(PCPA)引起的小鼠失眠现象。氟马西尼(FLU)抑制了阿勒泰羊角壳及角塞的镇静催眠作用,阿勒泰羊角壳及羊角塞阻断了FLU对小鼠海马区γ-氨基丁酸(GABA)表达水平的抑制作用,不同程度的提升了小鼠海马区GABA的水平;改善了由氨基硫脲(TSC)引起的GABA含量降低导致的中枢兴奋状况,发挥了缩短睡眠潜伏期、延长睡眠持续时间的促进睡眠的作用。综合结果表明,阿勒泰羊角壳及角塞均可通过对5-HT能和GABA能神经系统调节而表现出显著的镇静催眠作用,且相同剂量下阿勒泰羊角塞的镇静催眠活性更稳定,效果更好。(2)镇痛作用热板实验中,阿勒泰羊角壳及角塞均表现出显著的中枢镇痛作用,与阳性药阿司匹林相比,在中枢镇痛作用持续时间方面,阿勒泰羊角壳及角塞不如阿司匹林的作用效果持久。醋酸扭体实验中,二者高剂量对小鼠的外周镇痛作用与阳性药阿司匹林相当,说明阿勒泰羊角壳与羊角塞均具有较好的外周镇痛作用。综合以上,阿勒泰羊角壳及羊角塞均具镇痛作用,尤其在外周镇痛作用方面,与阿司匹林相当。(3)解热作用通过干酵母诱导大鼠感染性发热模型,实验结果显示,阿勒泰羊角壳及角塞不同程度的推迟了体温达峰时间,显著的抑制了干酵母诱导的大鼠体温升高。其中阿司匹林组和羚羊角组在5h后开始直到实验结束,体温与模型组相比均呈显著降低趋势;阿勒泰羊角壳高剂量组及阿勒泰羊角塞中高剂量组在给药5h后的多数时间点(除8.5h)呈现显著低于模型组的趋势。由此可见阿勒泰羊角壳及角塞均具有解热作用,但作用效果弱于羚羊角。综合上述镇静催眠、解热镇痛动物实验结果可以得出,阿勒泰羊角壳及角塞具有显著的镇静催眠活性和解热镇痛作用,尤其是在外周镇痛作用方面,与阿司匹林相当。为阿勒泰羊角的资源开发奠定了基础。
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