论文部分内容阅读
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种应用范围极其广泛的革兰氏阳性细菌,近几年有研究表明,非杀虫性的苏云金芽孢杆菌可在体外选择性的杀伤人类肿瘤细胞。本研究初步确定了适合于大多数Bt晶体蛋白的碱溶及酶解的条件,并以HepG2、A549、HL-60为靶细胞,分别检测了82、167和79株以非杀虫性菌株为主的Bt菌株对肿瘤细胞的杀伤活性。对HepG2细胞的筛选获得了一株有效菌株,但该菌株的重复效果不理想,杀伤细胞的活力不高。对A549细胞筛选发现六株菌株的晶体蛋白可导致A549细胞死亡,其中两株菌株有溶血活性,其余四株菌株无溶血活性且无杀虫活性或弱杀虫活性,其血清型分别属于H3abc、H4ab、H10、H22,它们均可引起的细胞形态学的明显变化,且不同的孢晶混合物作用于A549细胞后引起的细胞病理学变化有一定区别,推测可能与其引起细胞死亡的机制不同。MTT细胞毒性检测表明,该四株Bt菌株的晶体蛋白以0.36mg/mL的浓度作用于细胞时,可分别导致A549细胞38.01%、42.12%、46.88%及69.42%的死亡。使用79株菌株对HL-60细胞进行筛选时,未发现有明显效果的菌株。
在筛选抗肿瘤Bt菌株的过程中,发现某些菌株可引起细胞的快速裂解,这种细胞快速裂解的现象可能与Bt的Cyt蛋白引起的溶血活性有关,为此对本实验室保存的Bt菌株中的cyt基因的分布状况进行了研究。使用cyt1、cyt2基因的通用引物,对80个标准菌株和143株Bt分离株进行cyt基因的PCR检测发现,分别有三株和九株菌株含有cyt基因。在九株含有cyt基因的Bt分离株中,有八株Bt菌株的H-血清型分别为H3,H14,H18,H21,而另一株Bt菌株SX-1的血清型未知。在这九株Bt菌株中,有五株不属于B.thuringiensis subsp。israelensis(H14),它们的蛋白质组成与israelensis亚种均有一定区别,且其中仅Y-5对库蚊具有明显杀虫活性;该五菌株对红细胞均有溶血活性,但各菌株的溶血能力有一定区别。