目的:来自现代生活中各个方面的压力常使人们处于应激状态中。适当的应激可以促进机体的进化与发展,被称为良性应激;如果机体长期处于应激所致的异常兴奋状态,则会造成多个系统功能紊乱并引发应激性疾病,甚至导致死亡,此时的应激就成为对人体有害的恶性应激。因此,对于良性应激与恶性应激的区分及其客观评价标准越来越受到人们的关注。本文通过对慢性复合应激状态下小鼠体重、生存时间、血清中必需元素及多项生化指标水平、耐缺氧能力及免疫组织病理结构等指标的观察,探讨应激对机体多个系统功能的影响,并试图找出可以区分良、恶性应激的量化指标。同时本实验还将慢性应激所致的相应指标的变化与应激相关基因多态性相关联,以探索慢性应激致机体系统功能可能的遗传学原因。方法:采用束缚、悬尾、水浸三种应激源共同作用建立慢性复合应激动物模型,并从以下几个方面研究慢性应激对机体产生的影响。1.通过分析慢性复合应激后小鼠体重的变化,对本实验动物模型的建立进行评价。2.在实施慢性复合应激过程中,记录各组小鼠每日体重变化及其生存时间,并在应激组与对照组之间以及应激组内各亚组之间进行比较,分析体重与生存时间之间的关系。3.通过检测慢性复合应激后小鼠血清中葡萄糖、白蛋白、总蛋白、肌酐及碱性磷酸酶等生化指标水平,研究慢性复合应激对各项临床生化指标的影响。4.采用SSP-PCR技术检测以MudoEb5和MudoEb7为代表的小鼠H2-Eb位点等位基因的多态性,同时分析H2-Eb等位基因多态性对慢性复合应激所致的小鼠血清生化指标变化的影响。5.采用原子吸收分光光度法检测小鼠血清中钙、镁、锌三种元素含量,研究慢性复合应激状态下这些元素的代谢变化情况。6.通过常压耐缺氧试验评估耐小鼠缺氧能力。比较应激组与对照组小鼠间体重、脾脏指数及耐缺氧时间,同时,将上述指标变化与H2-Eb等位基因多态性相关联,从基因学上研究慢性复合应激所产生的影响。7.采用透射电子显微镜技术观察慢性复合应激后小鼠胸腺组织细胞形态结构变化,试图从细胞形态学上研究慢性复合应激对机体免疫器官的影响及其可能机制。8.通过电击跳台实验对慢性复合应激后小鼠的学习记忆能力进行评价,分析慢性复合应激对机体行为智力的影响。结果:1.两组小鼠间初始体重分别为20.330±2.237和19.883±1.575(g),两者间没有显著性差异,P>0.05;应激组小鼠在应激第9天时发生第1例死亡,因此比较两组小鼠应激第8天体重,结果显示,应激组明显低于对照组,P<0.05。2.应激组第1至第21天体重(重复测量数据)明显低于对照组,P<0.05;应激组内亚组比较,小鼠的体重与其生存时间呈正比,且当应激组小鼠的体重相对于对照组降低大于5.78%时,其生存时间中位数为13.5天;若降低小于5.78%时,生存时间中位数为>22天。3.血清学生化指标结果:应激组小鼠血糖、肌酐水平较对照组升高,血清白蛋白、总蛋白以及碱性磷酸酶水平则较对照组降低,两组间各指标均有显著性差异,P均<0.05。4. H2-Eb等位基因检测结果:86只小鼠中,MudEb5型等位基因检测的阳性有65只(阳性率为75.58%),MudoEb7型等位基因检测的阳性有80只(阳性率为93.02%);MudoEb5型等位基因对慢性复合应激所致血清总蛋白、碱性磷酸酶水平的变化有显著影响;MudoEb7等位基因型别对慢性复合应激所致血清总蛋白、白蛋白及碱性磷酸酶水平的变化有显著影响。5.应激组血清中钙、镁、锌元素含量均较对照组降低,其中镁和锌含量减少有显著性差异,P<0.05;应激组血清中三种元素两两间均没有显著相关性,P>0.05。6.应激组小鼠体重、脾脏指数及耐缺氧能力均低于对照组,且具有显著性差异,P<0.05;MudoEb5型等位基因对应激所致体重、脾脏指数及耐缺氧能力变化具有显著影响;MudoEb7型等位基因对应激所致体重、脾脏指数变化有显著影响。7.透射电镜下观察发现应激组小鼠胸腺组织切片中出现大量典型的凋亡细胞形态,而在对照组组织切片中则呈现正常的淋巴细胞形态。8.在不同时间时进行的跳台实验结果显示,应激组小鼠错误次数均明显多于对照组,潜伏期均明显短于对照组,P<0.05。结论:1.慢性复合应激时小鼠体重增长明显受抑,证明本实验造模成功。2.体重增长受慢性复合应激抑制越明显,则证明机体产生的应激反应越强烈,小鼠的生存时间越短;当应激组小鼠体重相对于对照组,降低超过5.78%时,则提示该组小鼠有可能发生死亡。3.慢性应激对机体各项血清生化指标水平均有影响,且MudoEb7型等位基因阳性表达可能与应激状态时血清白蛋白、总蛋白、碱性磷酸酶水平变化有关;MudoEb5型等位基因阳性表达可能只与应激状态时血清总蛋白、碱性磷酸酶水平变化有关。4.慢性复合应激可导致小鼠血清中镁和锌含量显著降低。5.慢性复合应激对小鼠生长、免疫功能以及机体耐缺氧能力有影响。在慢性复合应激状态下,MudoEb7型等位基因表达阳性的小鼠的体重、免疫功能变化比该基因位点表达阴性的小鼠更为显著;慢性复合应激对MudoEb5型等位基因表达阳性的小鼠的体重、免疫功能以及耐缺氧能力的影响比对该型等位基因表达阴性的小鼠更为显著。6.慢性复合应激所致的免疫功能下降,可能与应激状态下机体免疫细胞发生凋亡有关。7.慢性复合应激可能导致小鼠学习记忆能力的下降。