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背景:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,是我国发病率和致死率最高的癌症之一。由于诊断手段的限制大多患者在确诊时已发展到中晚期,错过了最佳的治疗时机。实现肺癌的早期诊断且进行有效地治疗成为提高患者存活率的关键。循环DNA样本的取得实时、无创为肺癌的早期诊断带来了福音。通过分子生物学的手段发现灵敏度和特异性高的外周血生物标志物是工作的关键。我们对血浆循环DNA进行两方面的研究:一是评价血浆循环DNA完整性对肺癌诊断的价值。二是探讨血浆循环DNA甲基化与肺癌的相关性。方法:制备重组质粒标准品,建立实时荧光定量检测血浆DNA水平的方法,分别检测78例肺癌患者、78例健康人血浆中长度为102bp和377bp的β-actin(ACTB)片段水平,并分析血浆DNA的完整性(ACTB377/ACTB102)。利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆循环DNA水平及完整性在肺癌诊断中的价值。采用多重置换扩增(Multiple displacement amplification,MDA)技术联合巢式甲基化特异性PCR(nest methylation specific PCR,n MSP)法,检测78例肺癌患者、78例健康人血浆样本中基因启动子区的甲基化状态。结果:建立了检测循环DNA水平的可靠方法。肺癌患者循环DNA长、短片段的水平均显著高于健康对照组(P<0.0001),ROC曲线下面积(AUC)分别为0.833、0.742。肺癌患者血浆循环DNA完整度(0.2082±0.1328)高于健康对照组血浆DNA完整度(0.07796±0.0386),差异具有统计学意义,ROC曲线下面积(AUC)为0.912。肺癌患者血浆DNA水平与年龄、淋巴结转移情况、肿瘤大小等临床病理参数均无相关性。血浆样本中CDH13、RASSF1A、DLEC1、SEPT9、RUNX3基因启动子甲基化率分别为53.85%(42/78)、42.31%(33/78)、51.28%(40/78)、37.18%(29/78)、21.79%(17/78)。CDH13、DLEC1、RASSF1A、SEPT9组合对肺癌的诊断效能明显高于其他组,准确度ACC为81.41%,Youden指数为0.6282(灵敏度为80.77%,特异度为82.05%)。结论:本方法检测的血浆循环DNA水平及DNA完整度对肺癌的诊断准确性较高,联合其他血清标志物有望应用于肺癌的诊断及高危人群的筛查。血浆多基因联合甲基化检测有望应用于肺癌早期诊断中。