目的:　　 构建人载脂蛋白O(Apolipoprotein O，ApoO)表达质粒，采用大肠杆菌原核表达系统制备重组抗原apoO融合蛋白并将其纯化，获得浓度高、纯度好的重组apoO。　　 方法:　　 以人类肝脏cDNA文库为模板，聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction，PCR)法扩增apoO DNA；将目的基因片段插入质粒pET-32a(+)相应位点构建重组质粒并转化大肠杆菌E.coli DH10B进行克隆，挑选阳性菌落进行基因测序；以测序正确的质粒转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导蛋白的表达；以Ni-NTA亲和层析法纯化大肠杆菌表达的apoO融合蛋白；通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法鉴定表达的目的蛋白的正确性；并以BCA检测法测定合成的apoO重组蛋白的浓度。　　 结果:　　 1.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳证实在SDS-PAGE上出现一条约519 bp大小的基因片段，符合预期结果。　　 2.成功构建了pET-apoO质粒。阳性重组质粒经Bam H I和Xho I双酶切，1％琼脂糖凝胶电泳显示有2条特异性条带，其中1条与目的基因大小基本相同，另1条与酶切前质粒位置相近。酶切产物进行DNA测序结果显示重组质粒的插入片段符合GenBank公布的人apoO基因序列。　　 3.IPTG诱导含重组质粒pET-apoO的大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达重组蛋白，经SDS-PAGE电泳分析后表明在相对分子量32kD左右出现一条新的蛋白条带，基本符合目标蛋白分子量大小。　　 4.经Ni-NTA柱亲和纯化后的apoO融合蛋白SDS-PAGE电泳分析显示，在相对分子量34kD左右出现新的蛋白条带，与目标分子量相符，且无明显杂带。　　 5.根据BCA法计算重组融合蛋白apoO的浓度约为0.5mg/ml。　　 结论:　　 成功克隆出人apoO基因，并首次大量表达出纯度高的重组apoO融合蛋白。人apoO全长蛋白的成功表达，对临床及基础研究有着非常重要的意义。一方面，可以将其作为抗原制备针对apoO的抗体，从而为进一步检测不同人群血浆中apoO水平与疾病的关系奠定基础，为相关临床研究和诊断提供工具；另一方面，可将其运用于细胞及动物模型以便对apoO的功能进行深入研究，从而有助于探讨apoO在人体脂类代谢中的生理功能。