论文部分内容阅读
口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是一种高度接触性传染病，对国际贸易具有深远的影响，被OIE列为A类传染病之首。FMD控制和消灭策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群。在免疫接种的群体，大多数动物血清FMDV结构蛋白抗体均为阳性，故一些基于结构蛋白的诊断方法很难确定感染口蹄疫病毒与否。只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据。从已经发表的鉴别感染口蹄疫病毒动物和免疫动物的结果来看，3ABC和3AB是比较公认的良好检测用抗原，但也有一些在牛上进行的实验显示，少数的免疫动物体内存在3A抗体，这有可能是在疫苗制备过程中仍有微量3A蛋白残留，也有可能是一些交叉抗原的抗体所致。总之，这会影响基于3ABC或3AB的检测方法的特异性。我们利用筛选到的位于3ABC蛋白3B多肽上的保守的、具有强结合活性的F5表位建立特异性免疫检测方法可能是克服类似问题的一种途径。 用重组DNA技术，以pM18T-3ABC质粒为模板将F5表位(141-190位氨基酸)基因用上游引物1和下游引物扩增得到了目的大小的基因片段(150bp左右)，将F5片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切，与经BamHⅠ和HindⅢ双酶切的pET-28a(+)片段连接，转化TG1，依次将6个含F5片段串联，表达质粒命名为pET-28a-F5(+6)，然后在大肠杆菌中进行了表达，将表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质斑点ELISA。结果表明F5(+6)基因主要以可溶形式高效表达，表达产物具有免疫原性。以纯化的表达产物为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验F5(+6)-ELISA。用307份阴性血清和30份阳性血清等检测，结果表明，该检测方法的特异性为96％，初步的敏感性(preliminary sensitivity)为100％。证明F5(+6)-ELISA方法可用于口蹄疫的鉴别诊断。对经2次免疫的512份猪血清用F5(+6)-ELISA检测，同时作IHA检测，结果双阳性的为2.0％。 用NS-3AB作为识别抗原建立的ELISA是鉴别注苗和自然感染动物的可靠方法。用已知的阳性牛血清和阴性牛血清致核NS-3AB-ELISA，结果表明其特异性为100％。在上海各奶牛场都用“O”型FMD灭能浓缩苗作2次免疫接种，我们用NS-3AB-ELISA检测了852头奶牛，并作IHA检测。实验结果证明FMD灭能浓缩苗含有NS抗原极微量。