目的提取日本大耳白兔的外周血液和骨髓,进行体外分离、纯化和培养CD34+细胞,探讨CD34+细胞的生物学特性。方法采用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法进行筛选分离,可从血液和骨髓中培养CD34+细胞,对培养细胞进行细胞计数并绘制细胞生长曲线；分血液直接涂片组、血液白膜层组、骨髓直接涂片组和骨髓白膜层组。各组用免疫组化染色后进行观察、计数CD34+细胞密度(个数/mm2)。比较各组的区别。结果培养血液和骨髓细胞第7天开始,细胞进入指数生长期,生长旺盛,细胞呈“S”型生长；骨髓中的CD34+细胞生长较血液中的CD34+细胞旺盛；用免疫组化染色后,四组均可见CD34+细胞被染色,细胞阳性表达部位为细胞膜；血液CD34+细胞染色呈浅黄色,骨髓CD34+细胞染色呈深棕色；计数CD34+细胞密度,通过比较四组每立方毫米的细胞个数(由高至低)得出：骨髓白膜层组含CD34+细胞最多,其次为血液白膜层组、骨髓直接涂片组,最少的是血液直接涂片组。结论(1)CD34+细胞的各项研究可于细胞培养第7天开始进行。(2)CD34+细胞在骨髓的含量比血液内含量高,并且骨髓CD34+细胞生长比血液CD34+细胞旺盛。(3)免疫组化法显示,日本大耳白兔的血液和骨髓内均含有CD34+细胞,细胞阳性表达部位为细胞膜。骨髓CD34+细胞表达呈强阳性,血液CD34+细胞表达呈弱阳性。(4)用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法可分离出较多的CD34+细胞。