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目的筛选木蹄复方抗肿瘤活性组分,分析其化学组成并优化其提取工艺,考察其抗肿瘤功效,并初步探讨其可能的抑瘤作用机制。方法①常规水提和醇提的方法提取复方中水溶和醇溶性组分,MTT法测定木蹄复方水提取物和木蹄复方乙醇提取物对体外培养肿瘤细胞A549,Hela,QGY生长的抑制效应。分别采用乙醇沉淀和不同极性有机溶剂萃取的方法对木蹄复方水提取物进一步分离,MTT法测定水提醇沉后的上清液(S3)和沉淀(S2)以及各萃取组分(氯仿萃取物S-1,乙酸乙酯萃取物S-2,正丁醇萃取物S-3和水相部分S-4)对体外培养肿瘤细胞A549,Hela,QGY,Eca109,DU145和SGC-7901生长的抑制效应。②系统预试法分析S3化学组成,硫酸-蒽酮比色法测定其总糖苷含量,香草醛-高氯酸比色法测定其总三萜含量,亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定其总黄酮含量,福林酚-碳酸钠比色法测定总酚含量。正交试验法优化S3提取工艺。③MTT法测定S3对体外培养肿瘤细胞A549,Eca109, Saos-2, U2os, DU145和HCT116生长的抑制作用,流式细胞术检测S3对肿瘤细胞凋亡的影响。S3的急性毒性试验采用最大耐受量测定的方法。S3体内抑瘤试验采用S180和Lewis肺癌实体瘤小鼠肿瘤模型,将制备的两种实体瘤模型小鼠均分为模型组,低、中、高剂量(0.05,0.1,0.15g·kg-1)三个给药组和环磷酰胺(CTX)阳性对照组(0.03g·kg-1)。观察S3对荷瘤小鼠瘤质量,胸腺指数和脾脏指数,血清中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)水平的影响,检测小鼠外周血象。④采用Sephadex G-25凝胶常压层析对S3进行分离纯化,蒸馏水洗脱,收集合并组分。MTT法测定各组分对体外培养肿瘤细胞SMMC-7721生长的影响,采用S180移植瘤实体肿瘤小鼠模型对具有较强体外抗肿瘤活性的组分S33和S34进行体内抑瘤试验,将制备的肿瘤模型小鼠分为模型组,S33低、中、高剂量(0.005,0.015,0.04g·kg-1)三个给药组,S34低、中、高剂量(0.005,0.015,0.04g·kg-1)三个给药组和环磷酰胺(CTX)阳性对照组(0.03g·kg-1)。观察S33和S34对荷瘤小鼠瘤质量、胸腺指数和脾脏指数的影响。结果①木蹄复方水提物对A549,Hela,QGY3种细胞的IC50分别为(0.42±0.02),(0.46±0.12),(0.44+0.06)g·L-2；木蹄复方乙醇提取物对3种细胞的IC50分别为(0.57±0.09),(0.53±0.13),(0.56±0.10)g·L-2,木蹄复方水提物对肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用。S2对A549,Hela,QGY3种细胞的IC50分别为(0.87+0.02),(0.82+0.20),(1.01±0.28)g·-1；S3对A549,Hela,QGY3种细胞的IC50分别为(0.32±0.14),(0.29+0.06),(0.38±0.14)g·L-1,S3较S2具有较好的抑瘤效果。S-2对Eca109,A549,SGC-7901,DU1454种细胞较其他三种组分具有较强的抑制作用,IC50分别为0.17,0.16,0.13,0.11g·L-1。②S3含有有机酸,糖、多糖和苷类,皂苷,黄酮及其苷类,内酯、香豆素及其苷类,植物甾醇、三萜成分以及挥发油和油脂等多种成分。S3总糖苷含量在33.00%以上,总三萜含量在5.50%以上,总黄酮含量在7.80%以上,总酚含量在10.00%以上。S3的最佳提取工艺为提取温度100,提取时间℃.5h,提取次数2次,料液比1：15。按最佳工艺条件提取3批药材,S3得率分别为4.14%,4.32%,4.36%；总糖苷含量分别为35.20%,35.83%,35.59%。③S3对A549, Eca109, Saos-2, U2os, DU145和HCT116细胞的生长均有较强的抑制作用,并且有时间和剂量依赖关系。S31g·L-1作用于A549细胞24h后,可明显观察到细胞凋亡现象,细胞凋亡率为14.8%。S3没有显示明显的急性毒性,小鼠对S3的最大耐受量大于10g·kg-1。与模型组比较,S3高剂量组能显著抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.05),提高胸腺指数(P<0.05),降低血清中M-CSF水平；中剂量组可显著抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.05),提高胸腺指数(P<0.05),降低血清中M-CSF水平,S3三个剂量组均能显著提高S180和Lewis肺癌荷瘤小鼠血清中TNF-a水平(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,S3各剂量组对S180荷瘤小鼠外周血象基本没有影响；S3中剂量组可使Lewis肺癌荷瘤小鼠外周血红细胞数和血小板数升高(P<0.05)。④共收集到S31,S32,S33和S34四个组分,其中S31和S32对体外培养的SMMC-7721细胞的生长表现为促进作用,S33和S34对SMMC-7721细胞的生长表现为抑制作用,IC50分别为(0.03±0.00)和(0.04+0.00)g·L-1,显示了较强的体外抗肿瘤活性。S33和S34对S180荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用均较弱,对荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数的影响也没有差异(P>0.05)。结论木蹄复方抗肿瘤活性组分S3对体外培养的多种肿瘤细胞的生长具有很强的抑制作用,具有显著的体外抗肿瘤活性,并可诱导A549细胞凋亡。S3没有明显的急性毒性,对S180荷瘤小鼠和Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长具有明显抑制作用,具有显著的体内抗肿瘤活性,其作用机制可能与提高免疫器官指数以及调节血清中TNF-a和M-CSF等细胞因子的表达有关。进一步深入研究有可能研发为一种新的抗肿瘤中药。