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目的将γδT细胞自健康成人外周血分离后,经多种细胞因子体外诱导分化,形成细胞体系后分组,再加入不同浓度香菇多糖(Lentinan,LNT)以确定LNT对γδT细胞抗肿瘤活性的影响,为临床如何应用LNT提高γδT细胞过继免疫治疗疗效提供理论依据。方法在无菌的前提下,通过密度梯度离心法分离健康成人外周血获取单个核细胞,用重组人IL-2(1000 IU/ml)、唑来膦酸(5uM)等细胞因子诱导扩增γδT细胞。采用直接细胞计数法,于体外培养的第0、4、7、10天计数γδT细胞。将体外培养第10天的γδT细胞分为12组,每组各设3个复孔,其中6组为实验组,分别加入1640培养液溶解的注射用香菇多糖,使其终浓度分别为0 ug/ml、5 ug/ml、10 ug/ml、25ug/ml、50 ug/ml、75 ug/ml,记为LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组、LNT-IV组、LNT-V组、LNT-VI组,剩余6组为对照组,记为LNT-I*组、LNT-II*组、LNT-III*组、LNT-IV*组、LNT-V*组、LNT-VI*组,然后按LNT的浓度梯度接种在96孔板上,继续培养,72小时后加入靶细胞,共培养24小时后,通过酶联免疫监测仪测定各孔细胞490nm处的吸光度(absorbance,A)值,记录数据。分别计算每份样品的各个药物(LNT)浓度诱导下的γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性,然后采用SPSS21.0统计软件进行分析,得出结论。结果(1)在培养的第10天用流式细胞仪检测γδT细胞的Anti-TCR-γδ表面标志表达为(41.30±12.80)%,CD44~+表面标志表达为(39.93±5.68)%,CD107a~+表面标志表达为(18.46±4.95)%,CD3~+表面标志表达为(96.15±0.49)%。(2)将体外培养第10天的γδT细胞分组,加入不同浓度LNT培养72小时,再加入靶细胞共培养24小时,各实验组的γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性表现出显著不同,各实验组间,除LNT-I组和LNT-V组间杀伤活性对比差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各实验组间两两对比差异均有极其显著统计学意义(P<0.001)。(3)LNT-I组(0 ug/ml)、LNT-II组(5 ug/ml)、LNT-III组(10ug/ml)、LNT-IV组(25 ug/ml)、LNT-V组(50 ug/ml)、LNT-VI组(75 ug/ml)杀伤活性分别为(34.70±2.14)%、(54.04±5.27)%、(90.73±3.68)%、(67.86±2.90)%、(40.14±2.33)%和(14.76±2.13)%。结论不同浓度LNT诱导的γδT细胞对肺癌A549细胞均有杀伤作用,LNT-II组(5 ug/ml)、LNT-III组(10 ug/ml)、LNT-IV组(25 ug/ml)浓度组较LNT-I(0 ug/ml)浓度组LNT诱导的γδT细胞对肺癌A549细胞杀伤作用明显加强(P<0.001),LNT-II组(5 ug/ml)、LNT-III组(10 ug/ml)、LNT-IV组(25 ug/ml)之间两两对比差异均有极其显著统计学意义,且杀伤活性呈剂量依赖性;LNT-V组(50 ug/ml)浓度组较LNT-I(0 ug/ml)浓度组LNT诱导的γδT细胞对肺癌A549细胞杀伤作用无明显差异(P>0.05);LNT-VI组(75 ug/ml)浓度组较LNT-I(0 ug/ml)浓度组LNT诱导的γδT细胞对肺癌A549细胞杀伤作用明显减弱(P<0.001)。综上所述,香菇多糖在一定剂量浓度范围内可以增强γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤作用,超出此范围后反而可能抑制其杀伤作用,此实验提示我们香菇多糖可用于临床中γδT细胞过继免疫治疗,但要通过更多的临床实验确定药物安全剂量范围、有效剂量范围及最佳剂量,才能造福肿瘤患者。