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在无明显逆境或病原物侵染时,植物自发形成类似病斑的一类突变体被称为植物类病斑突变体(LMMs)。籼稻93-11经γ辐射诱变,从其后代中分离得到了一个新的水稻类病斑早衰突变体lmes1,该突变体在苗期表型正常,但在分蘖早期,在没有任何病原菌侵染的情况下,在叶片上自发的形成棕色的小斑点,并且随着植株的成长,斑点的大小不变,但数目不断的增多;此外lmes1在进入孕穗期后,叶片开始黄化,且逐渐枯萎表现出了早衰的现象。本研究以野生型籼稻93-11为对照,对lmes1进行了表型鉴定、农艺性状考察、生理指标的测定、组织化学分析、细胞透射电镜观察、抗性鉴定及抗病相关基因的表达等研究,并对lmes1基因进行了精细定位。研究结果为进一步克隆该基因并了解细胞早衰和程序性死亡的分子机制奠定了基础。 1、lmes1在苗期叶片的表型正常,在进入分蘖期后叶片上开始出现细小的棕色的小斑点,并且随着植株的生长,数目不断的增多;进入孕穗期后,叶片开始黄化早衰,并在成熟期枯萎直至死亡。在农艺性状考察中,发现突变体的株高显著变矮,结实率和千粒重显著下降,但穗长和每株有效穗数差异不大。 2、为了进一步说明lmes1发生了早衰,分别测定了突变体和其对应的野生型植株的一些生理指标,如叶绿素含量、光合速率、可溶性蛋白(SP)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶的活性等。其中相较于野生型亲本93-11而言,lmes1的叶绿素含量、光合速率、可溶性蛋白含量都要降低,而丙二醛的含量却比野生型高,SOD酶活性在前期两者都表现出上升的趋势,但是在后期,lmes1比野生型下降早且迅速。 3、在透射电子显微镜下我们对lmes1及野生型相对应部位的叶肉细胞和叶绿体结构进行了观察,发现在整个叶肉细胞中lmes1的叶绿体数目减少,且类囊体垛叠不规则,叶绿体也出现不同程度的降解。 4、经过依文思蓝染色,lmes1有斑点的地方被染成了深蓝色,而野生型植株和突变体叶片的正常部位则没有深蓝色的小斑点出现。DAB染色,lmes1叶片上生成了红褐色的沉淀,而野生型叶片上没有,说明突变体上有大量的H2O2生成。 5、分别对lmes1和野生型植株接种3个白叶枯病小种(CR2,CR4和CR7),发现lmes1植株相较于野生型植株抗性显著增强。同时也检测了3个抗病相关基因PR1a,PR1b和POX22.3的表达,发现他们的相对表达量在lmes1中有不同程度的提高,最高的到了野生型的近20倍。 6、本研究运用图位克隆法对该基因进行了精细定位。lmes1与日本晴杂交,在其F3群体中获得了940个隐性单株,利用新发展的InDe1标记把lmes1基因定位在了7号染色体长臂端粒处标记ZL-3和ZL-22之间88kb的区间内,这个区间内共有15个开放式阅读框架。