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棉花纤维次生壁合成需要很多基因的参与,类几丁质酶基因(CTL)在次生壁增厚期优势表达,可能就是其中之一。在本实验室早期研究海岛棉纤维发育相关基因表达谱克隆了两个基因,分别命名为GbCTL1和GbCTL2。进一步搜索棉花的EST文库TIGR,分析发现纤维优势表达的CTL就只有两个成员。Realtime-PCR分析表明CTL1的表达量略高于CTL2,并且到达表达高峰的时间略早于CTL2,这两个基因都在15DPA以后开始表达,之后表达量迅速上升并持续到次生壁合成期结束。在其他的组织中CTLs的表达量很低甚至几乎检测不到。
本研究为验证CTLs在棉花纤维次生壁合成中的功能,分别构建35S超量表达载体和RNAi载体,转化棉花YZ1。通过Southern杂交及表达量分析,筛选出插入低拷贝表达量变化明显的植株进行纤维性状考察。RNAi转基因株系纤维变长,超表达纤维变短,但其他性状如强度、马克隆值等变化不明显。另外GbCTLs的表达量变化对纤维的纤维素含量以及次生壁厚度变化没有影响。为了研究该基因是否调控其他基因的表达,检测了已经发表的次生壁合成相关基因表达量。结果显示:在RNAi转基因株系中与纤维伸长正相关的Expansin的表达量上调,胼胝质降解酶GhGluc1的表达量下调,超量表达植株中的表达量变化则与RNAi植株相反。推测可能RNAi株系中Expansin的上调及GhGluc1降解酶的下调增加了胼胝质含量,从而细胞壁的柔性增加而纤维得以伸长。GbCTLs在纤维发育中的功能及机制还需要进一步研究,但从目前的研究结果可以预见在育种中可以采用降低该基因表达量而增加棉花纤维长度策略。