稻曲病菌遗传多样性分析及其致病性分化测定

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稻曲病是由Ustilaginoidea virens(Cooke) Tak引起的一种世界性水稻穗部真菌病害。近些年来,随着杂交水稻的大面积推广和增产措施的采用,稻曲病由次要病害逐渐上升为主要病害,引起了植保界和水稻育种界的高度重视。以往对稻曲病的研究多限于病原菌生物学特性、病害田间观察、发生原因、防治对策等方面,而病原菌遗传多样性、致病性分化等观点尚未统一。对稻曲病菌的遗传多样性研究多集中在不同地区、不同年份、不同寄主材料上的菌株群体遗传分析,由于稻曲病菌的遗传特性受多个因素共同影响,至今也未得出较为统一的结论,这在很大程度上制约了抗病育种工作的开展。分析同一地区、同一时期、同一寄主材料上的稻曲病菌的遗传多样性及其致病性分化情况,能够在不增加变量的情况下,更准确的分析稻曲病菌的群体遗传结构和致病性分化之间的联系,为抗稻曲病育种提供理论依据。  本实验对四川雅安草坝病圃高感稻曲病品种蒲江6号上分离的88个单孢菌株,进行了生物学特性观察、遗传多样性及致病性分化测定,主要结果如下:  供试菌株的遗传多样性:通过对稻曲病菌进行MLST分析,选用具有丰富SNP位点,且易于扩增单孢菌株的2个maker,对88个单孢菌株进行扩增。Maker1和maker2分别成功在62个菌株和49个菌株中扩增出清晰条带,其中有39个菌株在两个maker中都能扩增出条带;只能在maker1中扩增出条带的菌株有23个;只能在maker2中扩增出条带的菌株有10个,分别占供试菌株的44.3%,26.1%,11.4%。  测序结果采用MEGA5.1软件分析,依据邻接法(NJ)建立分子树。Maker1将62个供试菌株分为4个遗传类群:Ⅰ类有31个菌株,为优势类群,Ⅱ类有7个菌株,Ⅲ类有1个菌株,Ⅳ类有23个菌株,分别占供试菌株群体总数的50%、11.3%、1.6%、37%; Maker2将49个供试菌株分为4个遗传类群:Ⅰ类包含40个菌株,为优势类群,Ⅱ类包含2个菌株,Ⅲ类包含3个菌株,Ⅳ类包含4个菌株,分别占供试菌株群体总数的81.6%、4.1%、6.1%、8.2%。遗传分类结果表明:同一地区,同一年份,同一寄主材料上的稻曲病菌之间也存在遗传多样性,甚至同一稻曲球上都表现出遗传差异。  供试菌株的生物学特性:对供试的88个菌株进行了产孢量、菌落颜色、菌株形态观察。88个菌株产孢量之间存在差异,菌株产孢量在100×105个/ml以上的有14个,占供试菌株比例为15.9%,产孢量在10×105个/ml以下的菌株有6个,占供试菌株比例为6.8%;菌落分为白色、黄色、黄褐色、深绿、褐色5种颜色,各自占供试菌株的比例为15.9%,59.1%,4.5%,12.5%,8.0%;菌落形态分为平齐菌落和隆起菌落两类,平齐菌落占供试菌株的56.8%,隆起菌落占供试菌株的43.2%。  生物学特性和遗传多样性间的关系:供试菌株的每种生物学特性(产孢量的多或少,菌落的平齐或隆起,菌株不同颜色)在两个maker分出的不同遗传类群中都存在。由此可见,菌株的基因类群与其生物学特性之间并无相关性。  致病性分化:根据遗传分类结果,从4大类中共选出10个菌株在4个感病水稻材料上分别进行人工接种,测定菌株致病性。10个菌株对高感病水稻材料HR2306的致病力都不强;除了78-4-12、2-1-11、3-21-8三个菌株外,其余的菌株对高感病水稻材料08R2394都表现出强的致病性;菌株78-4-12在4个感病水稻材料上的平均病粒数小于10个,表现弱致病力;2-1-11对4个感病水稻材料无致病力;3-21-8只对高感水稻材料蒲江6号表现强致病力;2-9-10只对高感水稻08R2394、中感水稻92-548表现强致病力。实验结果表明,供试的10个菌株,在4个不同的感病水稻材料上表现出明显的致病性分化现象。  致病牲分化与遗传多样性间的关系:接种在蒲江6号水稻材料上的10个菌株的致病性差异划分结果与10个菌株在maker1扩增下,遗传分类类群划分结果规律一致。推测maker1可能与蒲江6号上稻曲菌的致病性相关联。
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