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鳗鲡是福建省的优势水产养殖品种,其产值在水产品进出口贸易中占有重要地位。但是,鳗鲡养殖过程中病害的频繁发生和流行给业者造成了巨大损失,严重阻碍了产业的健康发展。本人所在的实验室成功从收集的鳗鲡病料中分离出一株鳗鲡病毒,通过电镜形态学观察、分子生物学检测等手段对分离的病毒进行鉴定,确定其为给多国鳗鲡养殖业造成巨大损失的鳗鲡疱疹病毒(AngHV),这也是我国大陆首次分离出该病毒。AngHV是具有囊膜的线性双链DNA病毒,基因组全长248.5Kbp,包含136个独特的开放阅读框(ORFs)。Beurden等对AngHV-1的结构蛋白进行鉴定以及定位,结果显示,ORF51和ORF95为AngHV-1的主要结构蛋白。因此,ORF51和ORF95有可能会成为制备基因工程疫苗的候选基因。本文选择ORF51和ORF95两个基因进行研究,主要取得以下研究结果:1.对ORF51和ORF95基因序列及其编码蛋白的生物信息学分析,结果显示ORF51基因不含保守结构域,其编码蛋白含有跨膜区、不含信号肽;ORF95基因含保守结构域,其编码蛋白含有跨膜区和信号肽,ORF95蛋白与传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)血凝素酯酶蛋白(HA)有关联,可能参与病毒的吸附和出膜。2.设计引物,克隆了AngHV-FJ ORF51和ORF95两个基因,并利用原核表达载体pGEX-4T2和pET-32a,在大肠杆菌中表达了ORF51蛋白和ORF95蛋白。Western Blot分析表明,蛋白得到了成功表达,大小分别为52kDa和62kDa。3.纯化表达的融合蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗血清,ELISA分析表明,兔抗ORF51蛋白的血清效价为1:512000,兔抗ORF95蛋白的血清效价为1:2560000。