DNA人工酶的设计、合成及作用机理研究

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该文在研究核酸酶水解磷酸二酯键原理的基础上,首先从大肠杆菌中提取出质粒pBR322DNA,进而发现了两个简单的能够有效水解断裂脱氧核糖核酸(DNA)磷酸二酯键的体系:铜(Ⅱ)-L-组氨酸和镁(Ⅱ)-二乙基三胺配合物.发现了有可能作为DNA印迹式剂的Cu(Ⅱ)的配合物--皮考林酸铜.利用基因工种的连接技术,放射性<32>P同位素标记,核酸测序中启动子延伸方法并结合各种化学手段(如电喷雾质谱,高压液相,激光-拉曼光谱,园二色谱等)对配合物的切割行为进行了深入的研究.主要结果如下:1.首次发现铜(Ⅱ)-L-组氨酸(Cu(Ⅱ)-L-His)配合物能够在生理pH值及37℃条件下,有效切割质粒DNA和单链核苷酸二聚体2-腺嘌呤脱氧(3→5)-2-腺嘌呤脱氧核苷酸(dApdA);2.无论关于金属配合物对DNA切割作用的解释还是对有效人工核酸酶的计划均需要深入了解金属配合的与DNA的结合机制;3.首次发现镁-二乙基三胺(Mg(Ⅱ)-dien)配合物能够在中性pH值及37℃条件下,有效切割双链质粒DNA和单链核苷酸二聚体2-腺嘌呤脱氧核苷(3→5)-2-腺嘌呤脱氧核苷酸(dApdA);4.测定了Cu(Ⅱ)的配合物Cu(C<,6>NO<,2>H<,4>)<,2>·2H<,2>O的晶体结构.
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