关于萘酰亚胺—罗丹明能量转移体系构筑及应用

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近些年来,基于荧光检测方法检测金属离子和生物小分子越来越受到人们的关注,荧光检测方法已经常常被用在核苷酸的检测,蛋白质标记,免疫分析和环境保护等众多领域。荧光增强型和荧光比率型的单分子荧光团荧光探针能够有效的避免生物体系自发荧光的干扰,但是它们测试准确度极易受到环境因素的影响(比如pH,极性,温度等等),为了解决这一难题,具有供体-受体能量转移体系的构筑显得很重要,这个体系能够同时发射出两个不同波长处的荧光,实现荧光比率信号的变化,从而避免环境因素的干扰,提高检测的精确度,同时达到大Stokes位移检测的效果,此时荧光共振能量转移技术越来越受到重视。本论文设计并合成了基于萘酰亚胺-罗丹明的荧光共振能量转移两例探针RN1,RN2,实现了大Stokes位移检测Cu2+和Fe3+。经键能量共振转移的荧光探针RNl,在乙腈/Tris-HCl(20:1,v/v,pH7.4,10mM),可以很好的选择性识别Cu2+,对其它常见金属离子都没有响应,且不受其他阳离子的干扰,铜离子加入前后荧光从绿色变为黄色。RNl对较低浓度Cu2+的检测仍呈良好的线性关系,最低检出限为3.88×10-7M。经过对细胞荧光显微成像实验表明,探针的细胞通透性很好,并且细胞毒性比较低,在MCF-7细胞中能很好对Cu2+进行荧光显微成像。基于FRET机理,探针RN2对Fe3+有很好的选择性,并且不受其他阳离子的明显干扰。用410nm激发时,当加入Fe3+后,会在580m处出现明显的罗丹明发射峰,实现了大Stokes位移检测的目的,当加入EDTA时,罗丹明的发射峰逐渐降低,直至完全消失,表明该探针可以实现可逆性检测。我们进一步开展了探针在细胞中的成像实验,结果表明,探针RN2具有较好的细胞通透性,能在细胞中实现Fe3+的荧光成像。
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