【摘 要】
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目的：构建靶向新分子P27RF-Rho基因的慢病毒RNA干扰载体，研究P27RF-Rho基因对肝癌细胞Bel7402增殖能力的影响。下面是相关实验设计和结果。方法：实验分为3组：空白对照Bel7402组、
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目的：构建靶向新分子P27RF-Rho基因的慢病毒RNA干扰载体，研究P27RF-Rho基因对肝癌细胞Bel7402增殖能力的影响。下面是相关实验设计和结果。方法：实验分为3组：空白对照Bel7402组、阴性对照Scramble-siRNA组（感染U6-shRNA-CMV-copGFP-PGK-Puro-Scramble）和P27RF-Rho-siRNA组（感染U6-shRNA-CMV-copGFP-PGK-Puro-P27RF-Rho）。将合成的寡核苷酸片段克隆入RNAi载体，并转染肝癌细胞Bel7402，以沉默P27RF-Rho基因表达。荧光显微镜观察细胞转染情况；RT-PCR法检测各组Bel7402细胞中P27RF-Rho基因沉默效果；绘制生长曲线，检测转染细胞的增殖情况；平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力；RT-PCR法检测细胞增殖能力相关基因P16、Cyclin E、MMP9、CDK5mRNA的表达水平。结果：P27RF-Rho-siRNA组P27RF-Rho基因表达水平明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P＜0.01)。P27RF-Rho-siRNA组肝癌细胞的生长速度明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P<0.05)。与2个对照组比较，P27RF-Rho-siRNA组中CyclinE、MMP9、CDK5mRNA表达水平降低(P＜0.01)，P16mRNA表达水平明显显升高(P＜0.01)。结论：抑制P27RF-Rho基因的表达能够降低肝癌细胞的增殖能力。
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