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目的:为研究成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)在乳腺癌发生发展中信号转导的分子机制,以稳定转染FGFR1的人乳腺癌细胞株DCIS.COM+iFGFR1为研究对象,探讨:(1)肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(Tumor necrosis factor alpha-induced protein3,TNFAIP3)是否受FGFR1的调控;(2)FGFR1通过哪条信号通路调节TNFAIP3的表达;(3)FGFR1调控下的TNFAIP3对乳腺癌细胞增殖和成瘤的影响;方法:分别构建了DCIS-iFGFR1和DCIS-Ctrl细胞株,其中DCIS-iFGFR1能表达一种融合蛋白i FGFR1,i FGFR1能被AP20187激活,DCIS-Ctrl是转了空载体的对照细胞。以它们作为细胞模型,展开以下研究:(1)分别用iFGFR1的激动剂AP20187,FGFR的抑制剂LY2874455/AZD4547单独或共同处理DCIS-iFGFR1细胞后,提取RNA,采用荧光定量PCR法,检测TNFAIP3 mRNA的变化;处理24 h后提取细胞蛋白,采用Western blot检测TNFAIP3蛋白的表达变化。通过上述实验分析DCIS-iFGFR1中TNFAIP3是否受FGFR1调控。(2)分别以AP20187、MEK抑制剂PD0325901、ERK1/2抑制剂GDC0994单独或共同处理DCIS-i FGFR1细胞后提取蛋白,采用Western blot检测TNFAIP3蛋白的表达变化;采用CRISPR/CAS9法分别敲除DCIS-iFGFR1中的ERK1和ERK2,分别以AP20187处理对照细胞和ERK1/ERK2敲除细胞,提取蛋白,Westernbolt检测TNFAIP3的表达情况,通过上述实验分析FGFR1调控TNFAIP3表达的信号通路。(3)采用CRISPR/CAS9法建立TNFAIP3敲除的DCIS-iFGFR1细胞模型,检测2D培养和3D培养下细胞的增殖情况;分别建立DCIS-iFGFR1和DCIS-iFGFR1-KO-TNFAIP3异体移植的乳腺导管癌小鼠模型,检测裸鼠成瘤情况。通过上述实验,分析FGFR1调控下的TNFAIP3对乳腺癌细胞增殖和成瘤能力的影响。结果:(1)在DCIS-iFGFR1中,FGFR1可以明显上调TNFAIP3的表达。(2)FGFR1是以ERK1/2活性依赖的方式上调TNFAIP3的表达,且ERK2的缺失可以完全抑制这种上调作用,提示ERK2介导了FGFR1对TNFAIP3表达的上调。(3)FGFR1信号通路的激活显著地增强了DCIS-iFGFR1细胞的增殖和在小鼠体内的成瘤能力。与此同时,敲除TNFAIP3不仅能消除FGFR1信号通路介导的乳腺癌细胞增殖,也能显著降低FGFR1以外的其它生长因子介导的细胞增殖。结论:(1)在乳腺癌细胞中FGFR1通过激活ERK2 MAPK途径显著上调TNFAIP3的表达。(2)TNFAIP3能够同时促进FGFR1信号介导的和/或RAS突变刺激的乳腺癌生长。