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目的:研究原花青素B2(Procyanidins B2,PB2)对T-2毒素致小鼠睾丸间质细胞(TM3)损伤的保护作用以及分子机制,为将PB2作为霉菌毒素解毒剂的使用提供重要的试验依据和理论参考。方法:本试验以TM3细胞系为研究对象,在100nM T-2毒素染毒的同时加入不同浓度的PB2(20μM、100μM和500μM),并以公认的抗氧化剂水溶性V_E(Trolox)为阳性对照药物,初步探讨PB2对T-2毒素通过氧化应激诱导细胞凋亡的拮抗作用。(1)PB2对T-2毒素致TM3细胞氧化损伤的保护作用:TM3细胞用PB2和T-2毒素处理24h,使用MTT法检测细胞增值率;检测细胞中SOD、GSH-PX、CAT的活性和GSH、MDA的含量;流式细胞仪检测ROS的含量;Western Blot检测氧化应激损伤相关蛋白的表达。(2)PB2对T-2毒素致TM3细胞线粒体损伤的拮抗作用:流式细胞仪检测线粒体含量和线粒体膜电位变化;检测线粒体呼吸链复合酶Ⅰ-Ⅴ的活性、ATP含量以及CS的活性。(3)PB2对T-2毒素致TM3细胞凋亡的保护作用:Western Blot检测线粒体凋亡相关蛋白CyPD、Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-9的表达;分别检测细胞色素C(Cytochrome C,cyt c)在线粒体上和细胞浆中的含量;流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡率。结果:(1)T-2毒素会导致TM3细胞增值率下降,降低SOD、GSH-PX的活性和GSH含量,提高MDA、ROS的含量以及ASK1、JNK以及P38蛋白的表达;而当T-2毒素与PB2联合作用于TM3细胞时,SOD、GSH-PX、CAT活性和GSH含量升高,MDA的含量降低,ROS的含量减少,同时蛋白ASK1、JNK以及P38的表达下降。(2)T-2毒素致使线粒体含量减少,线粒体膜电位减弱,线粒体呼吸链复合酶Ⅰ-Ⅴ活性降低,腺嘌呤核苷三磷酸(Adenosine triphosphate,ATP)合成量减少,柠檬酸合酶(Citrate(Si)-synthase,CS)活性降低;当PB2与T-2毒素联合作用于TM3细胞时,能够使TM3细胞中的线粒体含量升高,线粒体膜电位增强,呼吸链复合酶Ⅰ-Ⅴ活性升高,ATP合成增多,CS活性升高。(3)与T-2毒素单独作用比较,PB2与T-2毒素联合作用于TM3细胞时,能够下调线粒体凋亡信号通路相关蛋白CyPD、Bak、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,下调Bax/Bcl-2的比值,同时上调抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达;减少cyt c从线粒体上释放入胞浆中。流式细胞仪检测发现,PB2能拮抗由T-2毒素引起的细胞凋亡率的上升。结论:PB2对T-2毒素所致TM3细胞氧化损伤具有保护作用,并能在一定程度上恢复线粒体的功能,所以PB2可通过清除氧自由基保护线粒体功能进而拮抗由T-2毒素诱导的细胞凋亡。