目的 评价同源重组因子Rad51蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况及其预后价值;研究Rad51表达升高对肿瘤细胞周期、凋亡和耐药的影响,并筛选通过调控Rad51表达而具有抗肿瘤活性和增敏作用的药物.研究材料和方法 收集所有1994年1月至1997年12月进行手术治疗的非小细胞肺癌病例及其肿瘤组织标本,采用常规方法构建组织芯片.同时,收集所有病例的临床病理学资料及预后随访资料.用免疫组化方法分析Rad51在非小细胞肺癌组织芯片中的表达情况,并分析Rad51表达与非小细胞肺癌的关系及预后价值.用已建立的可调控Rad51表达水平的UiRad和UiLac基因工程细胞系统,研究Rad51高表达在肿瘤发生、发展和治疗中的作用:①用免疫荧光的方法,观察Rad51在细胞内的表达情况及与细胞周期的关系;②用蛋白印迹杂交分析Rad51的表达及其与p53,p21,Chk1和Chk2的关系及药物对Rad51蛋白的调控情况,分析PARP酶的降解以了解Rad51表达与凋亡的关系;③用MTT方法检测肿瘤细胞对顺铂、Staurosporin、UCN-01和K252a等药物的敏感性.结论和创新 该研究发现,组织芯片技术为肿瘤的分子预后研究提供了经济、快捷、可靠的检测手段,尤其适用于大样本的分子预后研究;同源重组因子Rad51在非小细胞肺癌中存在过度表达,有近30％的非小细胞肺癌为Rad51蛋白的高表达,表明Rad51高表达是非小细胞肺癌中重要的分子事件;Rad51蛋白的表达与非小细胞肺癌患者的临床病理分期、病理类型和肿瘤组织分化程度等无相关性;Rad51蛋白的表达是非小细胞肺癌独立于TNM分期以外重要的预后因子,对不同分期和不同病理类型的非小细胞肺癌均有预后作用;Rad51蛋白表达水平的提高可引起非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的耐药,而这种耐药可能与Rad51升高所致的DNA修复能力升高、细胞周期阻滞和抗凋亡等机制有关;小分子PKC抑制剂Staurosporin、UCN-01和K252a可有效下调Rad51蛋白的表达,但只有K252a可抵抗Rad51升高所致的肿瘤耐药,并对顺铂的抗肿瘤活性有增敏作用;K252a针对Rad51升高所致的耐药机制及其对顺铂增敏作用的机制尚须进一步明确.到目前为止,该研究为采用组织芯片技术对非小细胞肺癌进行的最大样本的分子预后研究;首次对同源重组因子Rad51在非小细胞肺癌中的表达情况及其预后作用进行了研究,并发现Rad51是影响患者术后生存的独立预后因素.还首次发现小分子PKC抑制剂K252a不但可抑制Rad51的表达,而且可逆转由Rad51升高所致的肿瘤耐药,对顺铂等传统抗癌药有增敏作用.