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目的:本实验研究Nerolidol对小鼠烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,AF)性角膜炎的保护性作用,探索其用于治疗的可行性及分子机制。方法:1.通过MIC实验及细胞毒性实验测定Nerolidol对烟曲霉菌的抑菌浓度范围及对细胞的毒性作用,从而选取最佳药物浓度。2.C57BL/6小鼠随机分为四组,分别为对照组、真菌性角膜炎组、药物组以及药物处理后真菌性角膜炎组。采用基质内注射烟曲霉菌孢子的方法建立小鼠真菌性角膜炎模型。药物组以及药物处理后真菌性角膜炎组在感染后2小时、1天、3天、5天球结膜下注射Nerolidol(200μM/5ul)。对照组以及真菌性角膜炎组球结膜下注射等体积PBS。每天使用裂隙灯显微镜对小鼠角膜的感染情况进行观察并拍照记录。3.采用免疫荧光法对真菌感染的小鼠角膜基质内中性粒细胞和巨噬细胞的募集情况进行特异性标记。通过MPO法测定真菌感染的小鼠角膜基质中髓过氧化物酶的活性。4.采用RT-PCR和Western Bolt法检测各组小鼠角膜中模式识别受体LOX-1和促炎因子IL-1β的mRNA及蛋白表达。5.用烟曲霉菌分生孢子刺激HCECs建立真菌感染的细胞模型,分为对照组、真菌刺激组、药物组和药物处理后真菌刺激组。药物组以及药物处理后真菌刺激组的细胞培养液中加入Nerolidol,终浓度为200μM。对照组以及真菌刺激组的细胞培养液中加入等体积PBS。真菌刺激8小时和16小时收集细胞,分别用于RT-PCR和Western Bolt实验,检测模式识别受体LOX-1和促炎因子IL-1β的mRNA及蛋白表达。结果:1.Nerolidol在浓度为100μM时开始抑制真菌生长,且抑菌作用具有浓度依赖性。Nerolidol浓度为400μM时开始损伤HCECs的细胞活力。选取有效抑菌浓度范围内不影响细胞活力的最大浓度用于后续实验,即200μM。2.真菌感染后第3天和第5天,与真菌性角膜炎组相比,药物处理后真菌性角膜炎组小鼠角膜的炎症反应较轻,临床评分显著降低。3.与真菌性角膜炎组相比,药物处理后真菌性角膜炎组小鼠角膜基质中中性粒细胞和巨噬细胞特异性染色减少,MPO活性显著降低。4.与真菌性角膜炎组比,药物处理后真菌性角膜炎组小鼠角膜组织中模式识别受体LOX-1和促炎因子IL-1β的mRNA和蛋白表达均显著降低。5.在细胞实验中,与真菌刺激组相比,药物处理后真菌刺激组细胞中模式识别受体LOX-1和促炎因子IL-1β表达增高的趋势被显著抑制。结论:Nerolidol对烟曲霉菌的生长具有抑制作用。在烟曲霉菌性角膜炎中,Nerolidol可以通过抑制中性粒细胞和巨噬细胞的募集以及抑制LOX-1/IL-1β信号传导通路减轻炎症反应,发挥保护性作用。