论文部分内容阅读
目的：软骨终板的炎症病变在腰椎间盘退行性疾病的发病机制中起着关键性的作用。虽然HMGB1（high mobility group box-1 protein高迁移率蛋白-1）与软骨终板细胞的退变密切相关，但是具体的机制仍不清楚。因此，我们通过研究SD大鼠腰椎软骨终板细胞内HMGB1与基质金属肽酶-3（MMP-3），白细胞介素-10（IL-10）和血管内皮生长因子（VEGF）的关系，进一步探讨HMGB1在大鼠腰椎软骨终板退变中所起的作用。 方法：选取四周龄大鼠采取颈椎脱臼的方法处死，提取软骨终板细胞分离纯化，然后进行细胞鉴定。随后使用10%的FBS培养软骨终板细胞48h，再使用HMGB1（100ng/ml）刺激软骨终板细胞。分别使用RT-PCR、Western blot和Elisa从mRNA和蛋白质水平检测MMP-3、VEGF和IL-10的变化以及评估ERK和JNK信号转导途径磷酸化的变化。我们还使用了ERK和JNK信号转导途径抑制剂U0126和SP600125处理软骨终板细胞分为六组（control、HMGB1、U0126、SP600125、HMGB1+SP600125和HMGB1+U0126组），并用western blot检测MMP-3和VEGF和IL-10的变化。同样，我们还使用了RAGE抑制剂（FPSMZ1）处理软骨终板细胞分为四个组（control、HMGB1、FPSMZ1和HMGB1+FPSMZ1组），通过western blot检测ERK和JNK信号转导途径磷酸化的变化。 结果： 1、RT-PCR的实验结果：HMGB1增加MMP-3和VEGF mRNA的表达。同时，HMGB1降低IL-10 mRNA的表达。 2、Elisa的实验结果：随着HMGB1对软骨终板细胞刺激时间增长，IL-10蛋白水平呈现降低的趋势。HMGB1+ERK抑制剂（U0126）组与HMGB1组相比较，IL-10蛋白水平的表达明显增高。HMGB1+JNK信号转导途径抑制剂（SP600125）组与HMGB1组相比较，IL-10蛋白水平的表达无显著变化。 3、Western blot的实验结果：随着HMGB1对软骨终板细胞刺激时间增长，MMP-3和VEGF蛋白表达水平呈现升高的趋势。HMGB1+ERK信号转导途径抑制剂（U0126）组与HMGB1组相比较，MMP-3和VEGF蛋白表达水平明显降低。HMGB1+JNK信号转导途径抑制剂（SP600125）组与HMGB1组进行比较，MMP-3和VEGF蛋白表达水平明显降低。随着HMGB1对软骨终板细胞刺激时间增加，ERK和JNK信号转导途径磷酸化表达明显升高。HMGB1+RAGE抑制剂（FPSMZ1）组与HMGB1组相比较，ERK和JNK信号转导途径磷酸化表达明显降低。 结论：研究结果表明在SD大鼠腰椎软骨终板细胞中，HMGB1可以通过ERK和JNK信号转导途径增加MMP-3和VEGF的表达以及降低IL-10的表达导致软骨终板退变。