草莓花药培养中显微结构变化及愈伤起源研究

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草莓(Fragaria ananassa Duch.)为蔷薇科草莓属多年生常绿草本植物,是世界七大水果之一,在各国的小浆果生产中一直居于首位。从花药培养中获取单倍体植株是进行草莓花药培养的初衷,但由于其小孢子难于恢复分裂及花药孢子体部分的易于脱分化,使由花药培养获取草莓单倍体植株变的极为困难。本试验通过对草莓花药培养中影响出愈率的因素、愈伤起源及花药解剖结构的变化进行较系统的观测,进一步对影响草莓花药培养出愈率的因子进行了研究,并初步对草莓花药培养时药壁、药隔及小孢子产生愈伤组织的进程及其对外加激素变化的反应进行了探讨。结果表明:①品种基因型、培养基中所附加的激素种类与浓度和Fe盐含量、以及接种前的冷处理对草莓花药培养的出愈率均有不同程度的影响。试验中宝交早生和鸡心草莓的花药出愈率最高分别达到了95.4%和89.02%,而四季草莓的花药出愈率仅为63.3%,同时前两者对外界激素浓度变化的反应也较剧烈。合理的激素种类与配比和铁盐含量是产生愈伤组织所必需的,较高的细胞分裂素与生长素浓度比(KT/NAA达到(2mg/L)/(0.1mg/L),BA/NAA达到(0.5mg/L)/(0.1mg/L))可促进花药产生愈伤组织。培养基中无铁盐时,花药不能脱分化而产生愈伤组织,四季草莓和鸡心草莓均于基础铁盐含量(FeSO4. 7H2O(27.8mg/L)+Na2EDTA(37.3mg/L))的培养基上表现出了最高的出愈率(57.45%和60.58%)。接种前于4℃低温下处理4天也有利于刺激花药产生愈伤组织。②鸡心草莓花药培养中的愈伤组织主要起源于花药的孢子体部位,只有极少量的小孢子能恢复分裂能力。花药壁层细胞产生愈伤组织的能力受激素种类与浓度变化的影响明显,其产生愈伤组织的延续时间也较长。而且高的NAA/BA浓度比(达到(0.1mg/L)/(0.5mg/L)在一定程度上可抑制药壁产生愈伤组织。少数花药的药隔结构中靠近药室处的组织在培养到第5天时即膨胀、变形并突入药室,但到接种后20天仍未能得到来源于药隔的愈伤组织。③花药在培养过程中,不但外观上由最初的黄绿色变为褐色,增大扭曲,而且其显微结构也发生了明显的变化。药壁中层细胞在培养过程中多数解体,纤维层和表皮细胞则多数在受到外界刺激后而增大变圆并逐渐恢复分裂,从而使药壁呈多层细胞叠垛状;药隔组织在培养初期的变化也很明显,但在随后的培养进程中(到培养20天)除少量解体外,大多数未发生进一步的变化;只有极少量的小孢子在培养中增大,其中又仅有一小部分进行分裂形成二核花粉。
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