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1目的通过免疫组织化学SP法检测慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)患者程序性死亡分子配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)在肝组织中表达水平,分析不同病情程度CHB患者PD-L1的表达情况,及其与肝脏炎症分级、纤维化分期的相关性,并探讨CHB患者PD-L1的表达与不同中医证型的相关性。2方法参照CHB诊断标准,对纳入本实验的60例患者进行中医辨证分型,可分为以下五种证型:肝郁脾虚证、脾肾阳虚证、肝肾阴虚证、湿热中阻证和瘀血阻络证,并将这五组证型分为两大类:其中将肝郁脾虚型、脾肾阳虚型和肝肾阴虚型归为偏虚证组,另外2型归为偏实证组。对入组全部病例行肝组织穿刺活检术,再对肝组织做出病理学诊断。实验运用免疫组化SP法来对CHB患者肝组织中PD-L1的表达区域染色,并用Image-Pro Plus 6.0图像系统对阳性表达区域进行分析、测量,计算PD-L1在肝脏阳性表达的平均光密度(mean optical density,MOD)值,分析肝组织中PD-L1的表达特点与不同病情程度、肝脏炎症程度、纤维化程度及中医证型之间的关系。同时设置5例入组期间住院的需要手术治疗的肝血管瘤患者为正常对照组。3结果本研究共纳入60例CHB患者。(1)免疫组化染色结果显示,可见在CHB患者肝组织中的PD-L1呈阳性表达,且不同程度,而在正常对照组的肝组织中未见阳性染色;将所有病例按炎症等级分为G0、G1、G2、G3、G4组别,其肝组织中PD-L1表达水平的MOD值(X±s)分别为3.21±0.57、8.47±1.3 7、12.99±2.36、17.90±2.41和26.29±1.48;根据纤维化程度不同,可分为S0、S1、S2、S3、S4组别,其肝组织中PD-L1表达的MOD值(X±s)分别为3.62±1.13、8.94±1.26、14.40±1.69、19.04±1.39和25.24±2.43;按病情程度分为CHL、CHM、CHH三组,其肝组织内PD-L1表达的MOD值(X±s)分别为7.89±2.88、16.06±2.23、23.84±2.88。对实验结果进行统计学分析发现,在不同炎症度分组、纤维化分组、病情程度分组的三组内,PD-L1表达水平具有差异,且有统计学意义(P<0.05):MOD值与肝脏炎症程度呈正相关,相关系数为0.902(P<0.05),与纤维化程度呈正相关,相关系数为0.852(P<0.05)。(2)PD-L1的MOD值在不同中医辨证分型之间具有差异,其中瘀血阻络证组的MOD值最高,肝郁脾虚证的MOD值最低;将肝郁脾虚证分别与湿热中阻证、瘀血阻络证进行两独立样本t检验,均具有统计学差异(P<0.01),与其余两组比较,均无统计学差异(P>0.05);通过将肝郁脾虚证、脾肾阳虚证和肝肾阴虚证归为偏虚证组,另外2型归为偏实证组,统计显示PD-L1表达的水平在偏实证组显著高于偏虚证组,结果具有统计学差异(P<0.01)。4结论随着CHB患者病情程度的加重,PD-L1在肝组织中的MOD值随之增加。运用统计学相关性分析发现,肝组织中PD-L1表达水平与炎症活动度、纤维化程度均呈正相关。同时,PD-L1在肝组织中的表达水平与中医证型及虚实也是有一定相关性的。随着研究深入,PD-L1表达水平可能会作为CHB的中医辨证分型、临床诊断、中西结合治疗等方面客观的科学依据。