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背景慢性酒精使用可使脑灰质神经元变性,而对引起的脑白质纤维损害研究较少。动物实验表明喹硫平对脑白质损害有保护作用。故本研究期望通过建立慢性酒精处理所致大鼠脑白质损害模型并进行不同剂量喹硫平干预的基础上,从行为学、形态学、分子生物学等层面,研究慢性酒精处理所致脑白质损害及喹硫平的保护作用,为喹硫平在酒依赖疾病中的使用提供科学基础。目的1.通过测评喹硫平对慢性酒精处理大鼠戒断症状和学习记忆能力及其前额皮质区、海马区髓鞘超微结构的影响,探讨喹硫平对慢性酒精处理大鼠躯体依赖、认知功能和白质损害的影响。2.通过测定喹硫平对慢性酒精处理大鼠前额皮质区、海马区的髓鞘碱性蛋白(myeline basic protein, MBP)、髓鞘脂质蛋白(myelin proteolipid protein, PLP)转录、表达水平的影响,探讨喹硫平发挥神经保护作用的可能分子机制。方法1.100只SD雄性大鼠经Y迷宫筛选出得分无显著差异的80只随机等分为正常对照组、慢性酒精处理模型组、喹硫平低剂量干预组、喹硫平中剂量干预组、喹硫平高剂量干预组。除对照组外,各组大鼠自由饮用10%(V/V)的乙醇水溶液20周,建立慢性酒精处理大鼠白质损害模型,建模6w施加喹硫平干预,并在干预前、后行Y迷宫实验和戒断症状评分,观察行为学变化。末次评分后处死大鼠取脑组织,制备实验样品。2.应用投射电子显微镜观察各组大鼠前额皮质区、海马区髓鞘的超微结构。3.通过免疫组化和免疫蛋白印迹(Western blot)方法分别检测各组大鼠前额皮质区、海马区MBP和PLP的蛋白表达水平。4.采用荧光定量逆转录多聚酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction, RT-PCR)检测MBP、PLP勺基因转录水平。结果1.行为学结果：酒精处理6w大鼠戒断评分显著高于对照组(P<0.01),Y迷宫评分与对照组相比差异不显著(P>0.05)。酒精处理20w大鼠戒断评分显著高于对照组(P<0.01),Y迷宫评分显著低于对照组(P<0.01),喹硫平低、中剂量干预组大鼠戒断评分显著低于模型组(P<0.01),Y迷宫评分显著高于模型组(P<0.01)。2.电镜结果：慢性酒精处理大鼠前额皮质区、海马区髓鞘超微结构存在病理性改变。药物干预组大鼠被检脑区髓鞘超微结构、形态介于正常对照组和慢性酒精处理组之间。3.免疫组化结果：在大鼠前额皮质区,模型组MBP、PLP蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05),各干预组MBP、PLP蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.01)；在大鼠海马CA2/3区,模型组MBP、PLP蛋白表达水平较对照组显著降低(P<0.01),低剂量组MBP蛋白表达水平较模型组明显升高(P<0.05),中、高剂量组PLP蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.01)。4. Western blot结果：在大鼠前额皮质区,模型组MBP、PLP蛋白表达水平较对照组显著降低(P<0.01),各干预组MBP蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.01),喹硫平低剂量组PLP蛋白表达水平较模型组显著降低(P<0.01),喹硫平中、高剂量组PLP蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.01)；在大鼠海马区,模型组MBP、PLP蛋白表达水平较对照组显著降低(P<0.01),喹硫平低剂量干预组MBP表达水平较模型组明显升高(P<0.05),喹硫平中、高剂量组MBP蛋白表达水平较模型组显著降低(P<0.01),喹硫平干预组PLP表达水平较模型组显著升高(P<0.01)。5.荧光定量RT-PCR结果：在大鼠前额皮质区,模型组MBP mRNA、PLP mRNA转录水平较对照组显著降低(P<0.01),喹硫平各干预组MBP mRNA转录水平较模型组显著升高(P<0.01),喹硫平中剂量组PLP mRNA转录水平较模型组显著升高(P<0.01),高剂量组PLP mRNA转录水平较模型组明显升高(P<0.05)；在大鼠海马区,模型组MBP mRNA、PLP mRNA转录水平较对照组显著降低(P<0.01),低剂量组MBP mRNA转录水平较模型组显著升高(P<0.01),中剂量组MBP mRNA转录水平较模型组明显升高(P<0.05),喹硫平各干预组PLP mRNA转录水平较模型组显著升高(P<0.01)。结论1.SD大鼠10%(V/V)酒精饮用20w,出现明显戒断体征伴学习记忆能力下降,前额皮质区、海马区髓鞘形态出现病理性改变,合并使用喹硫平可使其改变。该慢性酒精处理方式造成了实验大鼠脑白质损害,喹硫平有保护作用。2.慢性酒精处理下调大鼠前额皮质区、海马区MBP、PLP基因转录和蛋白表达水平,合并使用喹硫平可拮抗之,可能是喹硫平发挥神经保护作用的分子生物学基础之一。