【摘 要】
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目的:分析鹿角胶对慢病毒载体介导人骨形态发生蛋白7(hBMP7)基因感染大鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖和成骨样转化的影响,为构建组织工
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目的:分析鹿角胶对慢病毒载体介导人骨形态发生蛋白7(hBMP7)基因感染大鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖和成骨样转化的影响,为构建组织工程骨的种子细胞提供理论依据。方法:①体外提取并培养大鼠BMSCs,通过形态学和细胞表面特异性标记进行鉴定;②构建携带人骨形态发生蛋白7的慢病毒载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞,采用RT-PCR以及western blotting分别检测BMP7的mRNA水平和蛋白表达水平;③设立对照组、鹿角胶组、BMP7组、联合组,连续培养后检测比较各组细胞的增殖,检测各组细胞的增殖,碱性磷酸酶、骨钙素、钙化结节,实时定量PCR检测BMSCs成骨样转化相关基因的表达水平。结果:成功分离纯化了高细胞活性、高分化潜能的BMSCs,所得细胞呈成纤维细胞样;成功构建携带BMP7基因的慢病毒载体PLV-sfGFP(2A)-BMP7,并通过感染含有hBMP7基因的病毒颗粒获得BMP7高表达的BMSCs细胞;培养基中加入鹿角胶以及BMSCs细胞的BMP7高表达促进了BMSCs的增殖,增强了细胞内碱性磷酸酶的活性,提高了细胞中的骨钙素含量,增强了Ⅰ型胶原、整合素α2和整合素β1的mRNA水平。结论:鹿角胶联合人骨形态发生蛋白7基因转染大鼠骨髓间质干细胞,大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力得到了明显加强。与单基因转染诱导以及单独鹿角胶诱导相比,联合组细胞的成骨功能最强,适合作为组织工程骨的种子细胞。
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