论文部分内容阅读
目的:通过观察HWTX-I 大鼠蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤在体动物模型海马CA1区锥体细胞及胞内线粒体形态结构变化、Fas凋亡通路相关因子核酸及蛋白表达的影响,探讨HWTX-I与由Fas分子启动的死亡信号转导通路之间的关系,确定其在以上模型中神经保护有效性和可能分子机制,为开发一种新型神经保护作用药物提供理论和实验依据。
研究方法:成年雄性SD大鼠48只,随机分为3组,即假手术组、非用药组和 HWTX-I1.0μg/kg剂量用药组,每组16只;每组8只用于光镜观察海马CAl区Nissl染色锥体细胞显微形态结构变化,电镜观察海马CAl区锥体细胞超微形态结构变化和免疫组化技术检测海马CA1区Fas凋亡通路相关因子蛋白表达变化;另8只用于PCR技术检测海马Fas凋亡通路相关因子mRNA转录水平变化;除假手术组大鼠外,非用药组和用药组大鼠都以“四血管闭塞法”构建全脑缺血再灌流损伤在体动物模型并结合蛛网膜下腔置管术。
研究结果:
1.光镜观察:在假手术组中,清晰可见数层锥体细胞排列整齐紧密;在非用药组中,锥体细胞排列散乱,分布稀疏,层次不完整;在用药组中,锥体细胞略呈疏散分布状态。
2.电镜观察:在假手术组中,锥体细胞线粒体嵴清晰可见,未见其出现断裂现象:在非用药组中,锥体细胞线粒体嵴模糊不清,出现线粒体嵴断裂和线粒体空泡化现象;在用药组中,锥体细胞线粒体嵴未出现明显断裂现象。
3.免疫组化定性实验:在假手术组中,几乎未见Fas、FasL(CD95L)、FADD、Caspase-3 及 Caspase-8蛋白表达;在非用药组中,阳性细胞数量多,较假手术组和用药组有更强 Fas、FasL、FADD、Caspase-3及 Caspase-8 蛋白表达;在用药组中,阳性细胞分布明显较非用药组少而稀疏。
4.免疫组化半定量实验:Fas、FasL、FADD、Caspase-3 及 Caspase-8阳性单位均值以非用药组为最高,其次是用药组,而假手术组最低;非用药组、用药组Fas蛋白表达与假手术组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01),用药组与非用药组比较差异具有显著性意义(P<0.05);非用药组FasL蛋白表达与假手术组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01),用药组与假手术组比较,差异具有显著性意义(P<0.05);非用药组、用药组FADD蛋白表达与假手术组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01),用药组与非用药组比较差异具有显著性意义(P<0.05);非用药组Caspase-3、Caspase-8 蛋白表达与假手术组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01),用药组与非用药组比较,差异具有显著性意义(P<0.05);HWTX-I 具有较明显降低全缺血再灌注大鼠海马CA1区锥体细胞Fas调亡通路相关因子蛋白表达水平作用。
5.RT-PCR技术检测:非用药组Fas、FasL、FADD及 Caspase-3 mRNA表达量与假手术组比较,差异都具有非常显著性意义(P<0.01);非用药组 Caspase-8 表达量与假手术组比较,差异具有显著性意义(P<0.05);用药组 Fas、FasL、Caspase-3 及 Caspase-8 mRNA 表达与非用药组比较差异都具有显著性意义(P<0.05);用药组 FADDmRNA 表达与非用药组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01);HWTX-I具有较明显降低全脑缺血再灌注大鼠海马细胞Fas调亡通路相关因子核酸表达水平作用。
结论:
1.HWTX-I蛛网膜下腔用药具有稳定全脑缺血再灌注损伤SD大鼠海马CA1区锥体细胞及其胞内线粒体形态结构的作用。
2.HWTX-I 蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤SD大鼠海马神经组织保护可能通过抑制Fas分子启动的死亡信号转导通路而发挥作用。
3.HWTX-I 对大鼠海马神经细胞在体外缺血缺氧培养时,钙离子通道和形态机能影响及神经保护量效关系、时效关系、分子机制有待进一步深入研究。