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第一部分mi R-1934在肥胖小鼠与肥胖人体内的表达研究目的:脂肪组织慢性炎症是肥胖相关代谢性疾病的共同基础,与胰岛素抵抗等多种代谢性疾病密切相关。近年来,研究显示多种micro RNAs在肥胖人群中的表达出现异常,其中部分与脂肪组织炎症密切相关。课题组前期研究中发现抗炎因子脂联素特异性调控的micro RNA,即mi R-1934,本部分研究拟探讨mi R-1934在肥胖小鼠与肥胖人体内的表达情况。方法:(1)高脂饮食喂养C57L/6J小鼠8周构建肥胖小鼠模型,检测小鼠血清代谢相关指标,荧光定量PCR检测脂肪组织中炎症因子与mi R-1934的表达情况。(2)收集21名正常与14名肥胖者网膜脂肪组织,检测脂肪组织中炎症因子的表达水平,同时检测mi R-1934的表达情况。(3)收集25名正常与24名肥胖者血清,检测血清中代谢与炎症相关指标,同时检测血清中mi R-1934的表达情况,并对血清mi R-1934水平与临床相关指标进行相关性分析。结果:(1)与正常对照组相比,高脂饮食喂养的肥胖组小鼠体重与脂肪/体重显著增加,同时血糖、血清甘油三酯与胰岛素水平亦显著增加,提示肥胖小鼠模型构建成功,且小鼠存在明显的代谢紊乱;(2)肥胖小鼠脂肪组织中促炎细胞因子白介素-6(IL-6)、巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)与CD-11c的表达水平显著增加,抗炎细胞因子脂联素(Adiponectin,Ap N)显著降低,提示肥胖小鼠脂肪组织中存在明显的炎症状态;同时,肥胖小鼠脂肪组织中mi R-1934的表达明显低于对照组。(3)肥胖人脂肪组织中炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达增加,而抗炎因子白介素-10(IL-10)与Ap N表达降低,提示肥胖患者脂肪组织中存在明显的炎症状态;同时,mi R-1934在肥胖者脂肪组织中的表达显著降低。(4)与对照者相比,肥胖人收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(Hb Alc)、空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2h PG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平增加,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、胰岛素敏感性指数(HOMA-IS)与Ap N水平显著降低,提示肥胖者体内存在明显的代谢紊乱及炎症状态;(5)mi R-1934在肥胖者血清中的水平显著低于正常者,且血清mi R-1934与BMI、WC、FINS、HOMA-IR、LDL-c以及hs-CRP呈显著负相关,与HOMA-IS呈显著正相关。结论:mi R-1934在肥胖小鼠及肥胖人脂肪组织显著降低,提示脂肪组织中mi R-1934的表达与脂肪组织炎症状态可能存在着密切关系。肥胖人血清mi R-1934水平亦显著低于正常者,且与肥胖及炎症相关临床指标存在显著相关性,提示血清mi R-1934可能作为潜在的生物标志物,为肥胖相关代谢性疾病提供新的诊疗靶点。第二部分mi R-1934在改善脂肪组织炎症中的作用研究目的:近年来,研究显示micro RNAs在肥胖诱导的脂肪组织炎症中具有重要作用。课题组前期研究提示mi R-1934是抗炎因子脂联素的靶micro RNAs,其很可能如同脂联素一样,具有抗炎作用。因此,本部分研究拟探讨mi R-1934在改善脂肪组织炎症中的作用。方法:(1)体外实验:利用TNF-α(50ng/ml)干预前3T3-L1与成熟3T3-L1脂肪细胞24小时,以模拟体内脂肪组织炎症状态,荧光定量PCR检测细胞中mi R-1934的表达情况;在上述两种炎性脂肪细胞中过表达mi R-1934,观察细胞中炎症细胞因子IL-6与MCP-1的m RNA与蛋白水平改善情况。(2)体内实验:分别利用连接有阴性对照与mi R-1934 mimic序列的慢病毒转染至3T3-L1前脂肪细胞中,收集一定数量的两种细胞,分别皮下注入裸鼠背部的左右两侧,高脂喂养裸鼠4周,检测裸鼠背部生长出的脂肪组织块中mi R-1934与炎症细胞因子的表达情况。结果:(1)体外试验中,TNF-α分别干预3T3-L1前脂肪细胞与成熟脂肪细胞后,细胞中炎症因子IL-6与MCP-1的m RNA水平显著增加,提示TNF-α干预构建的炎性脂肪细胞模型成功;在上述炎性脂肪细胞中mi R-1934的表达显著降低,与肥胖动物和人体内观察到的结果一致。进一步在上述细胞模型中观察到,过表达mi R-1934能显著降低脂肪细胞中的炎症细胞因子IL-6与MCP-1的m RNA以及蛋白水平。(2)体内试验中,裸鼠体内过表达mi R-1934的脂肪组织块中,促炎细胞因子IL-6、IL-1β与TNF-αm RNA表达显著降低,而抗炎因子IL-10的m RNA水平显著增加,提示过表达mi R-1934能有效降低体内分化形成的脂肪组织块中的炎症状态。结论:体内外实验共同提示了mi R-1934具有改善脂肪细胞炎症状态的作用,为脂肪组织炎症相关代谢性疾病的诊疗提供了新的视野。