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在世界范围内,由于感染金黄色葡萄球菌而引发的食物中毒普遍存在。金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,兼性厌氧菌,在显微镜下形状像葡萄串一样,它属于人兽共患病原菌。金黄色葡萄球菌具有病原性主要是因为产生一系列的毒性因子,包括蛋白A,凝固酶,胶原酶,透明质酸酶,溶血素,脂肪酶,不同的毒素,粘性蛋白,和一些影响生物膜结构的蛋白。金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)是金黄色葡萄球菌产生的肠毒素的一种。它是一种单体蛋白,它的分子质量是28366Da,等电点pI为8.6。SEB是一种热稳定蛋白。它还有抵抗变性剂变性的作用。它能与人类组织相容性复合物MHCII分子和T细胞的TCR受体结合,形成MHCII-SEB-TCR复合物。从而刺激T细胞产生致病因子,导致疾病。引发的主要症状有发烧,呕吐,休克,严重者甚至死亡。热休克蛋白65(HSP65)是高效免疫佐剂热休克蛋白的一种,热休克蛋白生物体或细胞在不良环境因素作用下所产生的一组特殊的蛋白质,它能保护机体或细胞不受或少受伤害。其作用是与新生,未折叠,错折叠或聚集的蛋白质相结合,使某些蛋白质聚集物解离,加速正确的肽键折叠和重折叠,促进蛋白质复性；维持某些肽链的伸展状态以利其跨膜转位,在线粒体,内质网等不同的区域内发挥作用,加速抗原的提呈。本实验成功构建了两个原核表达系统：一是构建了SEB的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化。以合成的seb DNA全基因序列为模板,PCR扩增seb1基因片断,克隆至pET-28a载体中,构建重组表达质粒pET-28a-seb1,转化E.coil BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经盐析和层析柱纯化,用thrombin切除组氨酸标签,再经层析柱纯化。二是构建了SEB(部分基因序列)和HSP65的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化。以合成的seb DNA全基因序列为模板,PCR扩增seb部分基因片断,克隆至pET-28a载体中。再以hsp65全基因序列为模板,PCR扩增hsp65基因片段,克隆至pET-28a-seb2载体中,构建重组表达质粒pET-28a-seb2-hsp65,转化E.coil BL21(DE3), IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经盐析和层析柱纯化,用thrombin切除组氨酸标签,再经层析柱纯化。用纯化的SEB2-HSP65融合表达蛋白皮下免疫小鼠,血清作为ELISA的抗体。SEB1毒素蛋白作为抗原,进行ELISA实验。其结果反映出SEB2-HSP65具有反应原性,为研究SEB毒素的致病机理奠定了基础。