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[目的]1.采用消化法体外培养出纯度较高的大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs)备用。2.与培哚普利作对照,观察红景天含药鼠血清对高糖条件下大鼠MMVECs的增殖活力、MMVECs上清液中血管内皮生长因子(VEGF)分泌量和MMVECs内VEGF基因表达水平的影响。[方法]新生5-7天Wistar大鼠,开胸心脏取材,用冷D-Hanks液反复冲洗3次,采用二次消化法(0.25%胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化)分离、培养MMVECs,利用差速贴壁法和亚细胞克隆法纯化MMVECs,用Ⅷ因子和CD31相关抗原进行鉴定。取培养至第3代的MMVECs,在培养基中加入50mmol/L Glu、含50mmol/LGlu的红景天(NDK)高、中、低剂量含药血清和培哚普利(PD)含药血清进行培养,72h时行MTT比色实验观察MMVECs增殖活性的变化,透射电镜下观察MMVECs超微结构的变化,并检测MMVECs上清液中VEGF的分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平。[结果]1.成功培养出纯度较高的MMVECs,可用于该项实验研究。2.MTT比色实验：各组随培养时间的延长,OD值有所上升,72h时各糖浓度下的OD值比48h上升显著,差异均有统计学意义(均P<0.05)。72h时,与正常对照组比较,各浓度组OD值都有所降低,以50mmol/L和75mmol/L时OD值的降低最为显著(P<0.01)。用50mmol/LGlu培养72h时,NKD低组和PD组的OD值较50mmol/LGlu组显著升高(均P<0.01),但两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.透射电镜下观察：高糖条件下MMVECs出现指状突起,溶酶体增多,线粒体肿胀,粗面内质网扩张。NDK低组含药血清作用后能改善这种损伤,其作用与PD组相似。4. ELISA法检测：高糖组、NDK高、中、低组和PD组MMVECs上清液中VEGF分泌量较正常对照组均显著降低(均P<0.01)；与高糖组相比,NDK中、低组和PD组MMVECs上清液中VEGF分泌量显著升高(P<0.05,P<0.01)。NDK低组和PD组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5. QT-PCR法检测：高糖组、NDK高、中、低组及PD组MMVECs VEGF-mRNA表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01)。与高糖组相比,NDK低组MMVECs VEGF-mRNA表达增高,差异非常显著(P<0.01),PD组MMVECs VEGF-mRNA表达也增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。NDK低组与PD组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]1.采用二次消化法原代培养,经差速贴壁法+亚细胞克隆法纯化的新生Wistar大鼠MMVECs,经Ⅷ因子和CD31相关抗原免疫荧光鉴定后,纯度可达95%以上,可用于正式实验。2.高糖对MMVECs的增殖有抑制作用。NDK低剂量组能促进高糖条件下MMVECs的增殖,其作用与PD组相近似。3.透射电镜下能观察到高糖对MMVECs超微结构的损伤,NDK低剂量组能改善这种损伤,其作用与PD组相似。4.高糖条件下,MMVECs上清液中VEGF分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平显著降低。NDK低剂量组可上调MMVECs上清液中VEGF的分泌量及MMVECs内VEGF的基因表达水平,其作用优于PD组。体外培养MMVECs,与培哚普利作对照,观察中药红景天含药血清对高糖条件下MMVECs及其VEGF的影响。分别从细胞水平和分子水平,观察红景天对高糖环境下大鼠MMVECs增殖活力、MMVECs上清液中VEGF分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平的影响,为红景天临床防治糖尿病心血管病变提供实验依据。经检索国内外文献未见此方面报道,为本课题的显著创新点。