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目的观察复合营养素食对Ob/Ob小鼠非酒精性脂肪肝病实验模型的作用及探讨其对于SIRT1/FOXO1通路的影响机制。方法SPF级健康4~8周龄雄性C57BL/6小鼠、Ob/Ob小鼠各20只,适应性喂养1周后采用随机数字表法平均分为4组:正常对照组、正常素食组、模型组对照组、模型素食组。正常对照组及模型对照组采用小鼠普通维持饲料喂养,正常素食组及模型素食组采用复合营养素食喂养,每周记录摄食量、体重。干预1个月和3个月,采取随机取样法分两批处理,每组各取5只小鼠处死。测量体重、身长,计算体质指数。分离肝脏称肝湿重,计算肝指数。留取血清检测谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),胆固醇(CHOL)。留取左叶肝脏部分肝脏组织行H&E、油红O染色及Masson染色,观察肝脏组织脂肪变、气球样变、炎症及纤维化病理变化,以NAFLD的SAF评分定量分析病理程度。留取右叶肝脏部分组织,采用RT-PCR法检测SIRT1mRNA表达水平,采用Western blot法检测SIRT1、AC-FOXO1蛋白水平,采用CO-IP法检测SIRT1与FOXO1之间的相互作用。进行相关统计学分析。结果:1、基本测量参数比较:与模型对照组相比,模型素食组摄食量(g)有所下降(21.93±2.98vs 30.91±2.18),差异有统计学意义(t=8.76,P<0.01)。复合营养素食干预1月,与正常对照组相比,模型对照组体重(g)明显增长(52.4±2.789 vs 23.74±1.24)、体质量指数(kg/m~2)明显上升(5.49±0.41 vs 2.83±0.2),肝湿重(g)明显上升(3.45±0.45 vs 1.04±0.17),肝指数(%)明显上升(6.56±0.55 vs 4.41±0.74),差异均有统计学意义(t值分别为21.001,12.926,11.2和5.222,P值均<0.01)。复合营养素食干预3月,与正常对照组相比,模型对照组体重(g)明显增长(59.87±4.63 vs 24.26±4.16),体质量指数(kg/m~2)明显上升(6.55±0.48 vs 2.91±0.26),肝湿重(g)明显上升(4.42±0.39 vs 1.29±0.29),肝指数(%)明显上升(7.38±0.39 vs 5.3±0.47),差异均有统计学意义(t值分别为12.796,14.899,14.41和7.647,P值均<0.01);与模型对照组相比,模型素食组体重(g)明显下降(50.28±2.37 vs 59.87±4.63),体质量指数(kg/m~2)明显下降(5.36±0.21 vs 6.55±0.48),肝湿重(g)明显下降(3.14±0.64 vs 3.45±0.45),肝指数(%)明显下降(5.3±0.4vs 7.38±0.39),差异均有统计学意义(t值分别为4.12,5.048,8.634和8.356,P值均<0.01)。2、血清ALT、AST、CHOL水平比较:复合营养素食干预1月,与正常对照组相比,模型对照组血清ALT(U/L)水平明显上升(688.16±289.34 vs 90.14±68.6),血清CHOL(mmol/L)水平明显上升(5.39±1.21 vs 2.61±0.77),差异均有统计学意义(t值分别为4.497和4.334,P值均<0.01);与模型对照组相比,模型素食组血清ALT(U/L)水平明显下降(150.96±54.77 vs688.16±289.34),差异有统计学意义(t=4.079,P<0.01)。复合营养素食干预3月,与正常对照组相比,模型对照组血清ALT(U/L)明显上升(623.54±202.36 vs 103.55±25.51),血清CHOL(mmol/L)水平明显上升(7.3±0.59vs 3.46±0.85),差异有统计学意义(t值分别为5.038和8.046,P值均<0.01);与模型对照组相比,模型素食组血清ALT(U/L)水平明显下降(55.58±11.61 vs 623.54±202.36),血清AST(U/L)水平明显下降(154.78±33.6vs 441.6±89.11),血清CHOL(mmol/L)水平明显下降(4.29±0.57 vs 7.3±0.59),差异均有统计学意义(t值分别为6.266,6.735和8.189,P值均<0.01)。3、肝组织病理:正常对照组及正常素食组肝组织病理示肝细胞形态结构正常,未见脂肪变性、炎症细胞浸润及纤维化等,而模型对照组肝细胞排列紊乱,可见明显脂肪变性,间质炎症细胞浸润,可见少数汇管区纤维性扩大;模型素食组肝细胞脂肪变性、炎症细胞浸润减轻。肝组织SAF评分显示:复合营养素食干预1月,与正常对照组相比,模型对照组SAF评分明显上升(5.6±1.14 vs0±0),差异有统计学意义(t=10.983,P<0.01),与模型对照组相比,模型素食组SAF评分无明显差异(5.4±1.14 vs 5.6±1.14,t=0.277,P>0.05);复合营养素食干预3月,与正常对照组相比,模型对照组SAF评分明显上升(6.8±0.84 vs0±0),差异有统计学意义(t=18.174,P<0.01);与模型对照组相比,模型素食组SAF评分明显下降(4.2±1.1 vs 6.8±0.84),差异有统计学意义(t=4.218,P<0.01)。4、肝组织SIRT1 mRNA表达水平比较:复合营养素食干预1月,与正常对照组相比,模型对照组SIRT1mRNA表达水平明显降低(0.266±0.051 vs0.813±0.097),差异有统计学意义(t=11.167,P<0.01);与模型对照组相比,模型素食组SIRT1mRNA表达水平明显上升(0.486±0.1 vs 0.266±0.051),差异有统计学意义(t=4.372,P<0.01)。复合营养素食干预3月,与正常对照组相比,模型对照组SIRT1mRNA表达水平明显降低(0.212±0.077vs 0.942±0.294),差异有统计学意义(t=5.368,P<0.01),与模型对照组相比,模型素食组SIRT1mRNA表达水平明显上升(0.503±0.08 vs 0.212±0.077),差异有统计学意义(t=6.278,P<0.01)。5、肝组织SIRT1及AC-FOXO1蛋白比较:复合营养素食干预1月,与正常对照组相比,模型对照组SIRT1蛋白水平明显降低(0.094±0.067 vs 0.334±0.073),AC-FOXO1蛋白水平明显上升(0.344±0.092 vs 0.118±0.081),差异均有统计学意义(t值分别为5.432和4.126,P值均<0.01);与模型对照组相比,模型素食组SIRT1蛋白水平呈上升趋势(0.218±0.084 vs 0.094±0.067),AC-FOXO1蛋白水平呈下降趋势(0.118±0.081 vs 0.344±0.092),但差异均无统计学意义(t值分别为2.586和1.123,P值均>0.05)。复合营养素食干预3月,与正常对照组相比,模型对照组SIRT1蛋白水平明显降低(0.124±0.097 vs 0.352±0.086),AC-FOXO1蛋白水平明显上升(0.328±0.008vs0.12±0.042),差异均有统计学意义(t值分别为3.928和10.902,P值均<0.01);与模型对照组相比,模型素食组SIRT1蛋白水平呈上升趋势(0.194±0.059 vs 0.124±0.097),但差异无统计学意义(t=1.38,P>0.05),AC-FOXO1蛋白水平明显下降(0.208±0.052vs0.328±0.008),差异有统计学意义(t=5.126,P<0.05)。6、SIRT1与FOXO1之间相互作用:结果提示:FOXO1与SIRT1间存在相互作用。结论:1、复合营养素食能调节Ob/Ob模型小鼠肝脏脂质代谢,降低酶学水平,减轻炎症,改善组织病理,治疗非酒精性脂肪性肝病。2、复合营养素食通过上调SIRT1表达,从而调节其下游靶基因FOXO1乙酰化的表达,激活SIRT1/FOXO1信号通路控制Ob/Ob模型小鼠体重增长,调节脂质代谢,减轻肝组织脂肪积聚、炎症,改善肝脏病理。