论文部分内容阅读
西门木炔酸(ximenynic acid或santalbic acid)是一种天然的十八碳共轭烯炔酸,最早在檀香科的植物中发现,迄今已有七十多年。它主要存在于山柚子科、铁青树科和檀香科的种子油中,含量从1-95%不等。其特殊的烯炔共轭结构赋予它许多生物活性,如抗细菌、抗真菌、杀蚴虫及抗炎等活性。本论文以澳洲檀木Santalum spicatum的檀香籽油(含西门木炔酸约35%)和檀香籽油提纯产物西门木炔酸为研究对象,研究内容包括西门木炔酸的提取纯化、体内与体外代谢、抗癌活性试验等三个部分。第一部分西门木炔酸自由脂肪酸和甘油三酯的分离纯化西门木炔酸的分离。以檀香籽油为原料,经水解、酸化、结晶等步骤提取西门木炔酸自由脂肪酸纯品,摸索西门木炔酸最佳结晶条件。檀香籽油甘油三酯的分离。Santalum spicatum檀香籽油主要含有三种甘油三酯,包括含三个西门木炔酸分子的XXX、含两个西门木炔酸分子的XXO/XOX以及含一个西门木炔酸分子的OOX/OXO。使用C18反相硅胶粉末填充的层析柱,通过乙腈/异丙醇洗脱液,可以将三种不同的甘油三酯分离。构建HPLC’快速分离和鉴定檀香籽油不同形式甘油三酯的方法。具体如下:使用反相硅胶HPLC和UV检测器鉴定檀香籽油中不同形式的甘油三酯。HPLC洗脱液为乙腈/异丙醇,UV检测器设定236nm的吸收波长,以2.5mL/min流速进行洗脱。第二部分檀香籽油或西门木炔酸对脂肪酸代谢的影响体内脂肪酸代谢研究。与橄榄油相比,饲喂檀香籽油后小鼠体重无显著差异;檀香籽油使血糖显著上升和并提高低密度脂蛋白水平;显著降低大脑组织总n-3PUFA含量;显著降低肝脏n-9单不饱和脂肪酸、显著提高n-3多不饱和脂肪酸的含量。体外脂肪酸代谢研究。西门木炔酸(从檀香籽油中提取分离获得)干预HepG2细胞后发现,n-9单不饱和脂肪酸C18:ln-9、C20:ln-9和C24:1n-9与总n-9单不饱和脂肪酸显著下降,这种作用可能与西门木炔酸能抑制硬脂酰辅酶A去饱和酶[stearoyl-CoA desaturase (SCD)]基因的表达有关;西门木炔酸显著降低C22:6n-3(DHA)的含量,并且抑制DHA合成关键酶FADS1(A5去饱和酶)和FADS2(△6去饱和酶)的表达。第三部分西门木炔酸的抗癌活性研究基于西门木炔酸的抗炎活性的报道以及炎症与癌症的密切联系,本实验以西门木炔酸纯品为研究对象,研究西门木炔酸对人癌细胞的细胞周期、增殖、凋亡的影响及潜在机制。实验结果如下:西门木炔酸显著阻滞HCT116和HepG2细胞周期G1-S的转换。具体表现为:G0/G1期细胞数量增多,S期和G2/M期细胞数量显著下降。同时西门木炔酸抑制HepG2细胞的细胞周期蛋白CCND3和CCNE1的基因表达,抑制GCN5L2的蛋白表达;还抑制CCND3和CCNE1和CDK6基因在HCT116中的表达。通过细胞增殖实验和细胞凋亡实验发现西门木炔酸能显著抑制HepG2细胞的增殖,并显著促进HepG2的凋亡。西门木炔酸还能显著抑制抗凋亡蛋白SIRT1的蛋白表达。癌细胞血管生成相关的血管内皮细胞受体基因VEGF-B和VEGF-C的表达也被西门木炔酸显著抑制。研究HepG2中环氧化酶COX-1和COX-2基因和蛋白表达发现,西门木炔酸能显著抑制COX-1的表达,但对COX-2的表达没有抑制作用。COX-1与细胞凋亡通路和细胞血管生成通路密切相关,因此可推断,西门木炔酸抗癌活性可能源于对COX-1的选择性抑制。