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鸡白细胞介素2(IL-2)、IL-15、IL-18及干扰素-γ(IFN-γ)是鸡体内重要的细胞因子,在鸡抗病和免疫应答反应中有重要作用。四川山地乌骨鸡是地方优良品种,具有生长快,适应性广、抗病力强等特点。目前有关四川山地乌骨鸡的IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ及其免疫学特性的研究,国内外均未见报道。克隆四川山地乌骨鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因,研制分子免疫佐剂及其对疫苗的佐剂效应,提高疫苗免疫应答,有重要学术价值和应用前景。 1.本试验用RT-PCR方法从conA刺激的四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞总RNA扩增了鸡白细胞介素2及γ-干扰素基因的cDNA。将分离的cDNA片段克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析。结果表明:鸡IL-2基因全部的开放阅读框432bp,与Genbank数据库中的序列进行同源性比较发现:山地乌骨鸡IL-2基因与其他品种鸡IL-2基因核苷酸同源性为98.4-99.5%。鸡IFN-γ基因全部的开放阅读框495bp,与GeneBank上报道的核苷酸序列同源性为97.4%-100%。四川山地乌骨鸡IL-2和IFN-γ克隆在国内外尚未见报道,本试验所克隆的鸡IL-2及IFN-γ基因,丰富了IL-2及IFN-γ基因的资源库,为进一步研究提供了基础材料。 2.用RT-PCR方法从conA刺激四川山地乌骨鸡的脾淋巴细胞总RNA扩增了鸡白细胞介素15基因的cDNA。将分离cDNA片段的克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析。结果表明:鸡IL-15基因基因全部的开放阅读框564bp,与Genbank上序列比较发现,山地乌骨鸡IL-15与其他序列同源性为98.9-99.8%。目前很少关于鸡IL-15的研究报道,四川山地乌骨鸡IL-15克隆在国内外尚未见报道,本试验为进一步研究鸡IL-15的疫苗佐剂效应奠定的基础。 3.本研究应用RT-PCR方法从conA刺激2h后四川山地乌骨鸡的脾脏组织总RNA扩增了IL-18基因的cDNA,将分离cDNA片段的克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析。结果表明:鸡IL-18基因全部的开放阅读框597bp,与GeneBank上报道的核苷酸序列同源性为96.5-100%。其中与Schneider等报道的序列完全一致。四川山地乌骨鸡IL-18克隆在国内外尚未见报道,本研究为鸡IL-18疫苗佐剂效应的研究提供了物质基础。 4.分别双酶切得到IL-2、IFN-γ、IL-15、IL-18 DNA片段,将其亚克隆入真核