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第一部分构建大鼠重组质粒pEGFP-Ci/GDNF目的：克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子(bone marrow mesenchymal stem cells GDNF)基因,构建大鼠pEGFP-C1/GDNF重组质粒。方法：由出生一周内的新生SD大鼠脑皮层组织提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出636bp的GDNFcDNA基因片段,产物克隆至pEGFP-C1真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析。结果：]RT-PCR产物为636bp特异片段,pEGFP-C1/GDNF重组体经酶切后分别为4.7kb和636bp片段,测序跟文献报道完全一致。结论：重组质粒pEGFP-C1/GDNF构建成功,为下一步实验奠定了基础。第二部分GDNF对骨髓间充质干细胞诱导分化作用的研究目的：利用基因转移技术将GDNF基因转入骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcellsBMSCs)。证明转染后MSCs内有GDNF蛋白的表达；及表达的GDNF蛋白能够诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞。方法：1.选用培养第4代形态均一性较好,经流式细胞仪检测纯度较高骨髓间充质干细胞,以Lipofectamine2000为载体转染BMSCS。2.分别采用pEGFP-C1/GDNF转染组、空载体组及未转染组进行对照研究。3.在转染后12小时、24小时、48小时、72小时及168小时采用倒置荧光显微镜来观察荧光、细胞形态及生长变化情况。4.运用RT-PCR来检测三组外源性基因mRNA表达。5.采用免疫组化法检测神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白(Nestin)结果：pEGFP-C1/GDNF转染组在12小时～1周内可见绿色荧光表达,48小时荧光最强,随后逐渐减弱,1周后仅可见微弱荧光；空载体组可见荧光表达,未转染组无荧光表达。高倍显微镜下12小时,细胞发生变形,个别细胞出现单极、双极的类神经元样细胞；48小时,细胞变形增多、结构清晰,出现双极、多极神经元样细胞,并可见细胞突起,相邻细胞突起形成连接；168小时,细胞胞体缩小,部分细胞出现核固缩、裂解、凋亡。空载体组及未转染组未见细胞形态阳性表达。RT-PCR检测结果显示转染组BMSCs中有GDNFmRNA表达；空载体组及未转染组无阳性表达。在24小时,48小时,pEGFP-C1/GDNF转染组有Nestin阳性表达,而对照组未见阳性表达。结论：重组质粒pEGFP-C1/GDNF成功转染BMSCs并获得了GDNF蛋白表达,表达的GDNF蛋白具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的潜能,并能促进神经元样细胞生长。