香泽兰总黄酮抗大肠埃希菌感染性腹泻机理初探

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香泽兰(Eupatorium odoratum Linn.)全草具有抗菌、消炎和免疫调节的作用,其主要药效活性成分为总黄酮。大肠埃希菌是引起畜禽腹泻最为常见的病原微生物之一,其耐药问题严重。为研究香泽兰总黄酮作为抗菌、抗腹泻饲料添加剂的可行性,本文提取香泽兰总黄酮,通过测定其对供试细菌的体外抑菌活性以筛选敏感菌株。通过给小鼠腹腔注射大肠埃希菌制作动物腹泻模型。在体内抗大肠埃希菌感染性腹泻试验中,将90只小鼠分为空白对照组,香泽兰总黄酮高、中、低剂量组,自愈组等5个组,每组18只小鼠。供试小鼠腹腔注射大肠埃希菌3 h后开始给高、中、低剂量组(160、40、10 mg/kg)小鼠灌胃给予不同剂量的香泽兰总黄酮,每天1次;空白对照组小鼠用生理盐水代替香泽兰总黄酮和大肠埃希菌悬液;自愈组小鼠只用大肠埃希菌腹腔注射感染,不作任何处理。通过检测小鼠腹泻率、体重增长量、粪便大肠埃希菌数、脾脏指数,以及免疫球蛋白含量、十二指肠绒毛结构变化及TGF-β1mRNA表达量的变化,探讨香泽兰总黄酮体内抗感染性腹泻的机理。结果如下:1.香泽兰总黄酮处理大肠埃希菌,抑菌圈直径为11.00 mm,MIC为0.1250 g/mL,MBC为0.2500 g/mL;处理沙门氏菌,抑菌圈直径为13.33 mm,MIC为0.0313 g/mL,MBC为0.1250 g/mL;处理金黄色葡萄球菌,抑菌圈直径为19.50 mm,MIC为0.0156g/mL,MBC为0.0313 g/mL;处理枯草芽孢杆菌,抑菌圈直径为13.67 mm,MIC为0.0625 g/mL,MBC为0.1250 g/mL。2.采用小鼠腹腔注射约3×108个大肠埃希菌可成功制作腹泻模型,腹泻率为100%,腹泻指数为0.99±0.36。3.口服一定剂量的香泽兰总黄酮可提高小鼠体重增长量,降低死亡率、腹泻率和粪便大肠埃希菌数,提高血清Ig A和IgG含量,其中口服高剂量香泽兰总黄酮的腹泻小鼠体重增长量最高,死亡率、腹泻率最低,粪便大肠埃希菌数极显著下降(P<0.01)及免疫球蛋白IgA(P<0.01)、IgG(P<0.05)含量显著升高。4.口服香泽兰总黄酮的试验组小鼠十二指肠绒毛结构损伤修复较自愈组快,其中高剂量组效果最好,小鼠十二指肠绒毛结构基本恢复正常。5.腹泻早期,与空白对照组相比,腹泻小鼠十二指肠TGF-β1 mRNA相对表达量极显著上升(P<0.01)且灌喂高剂量香泽兰总黄酮的小鼠TGF-β1 mRNA相对表达量显著高于其它处理组(P<0.05);腹泻后期,腹泻小鼠十二指肠TGF-β1 mRNA相对表达量下降,恢复至正常水平,但灌喂高剂量香泽兰总黄酮的小鼠TGF-β1mRNA相对表达量仍显著高于空白对照组及自愈组(P<0.05)。综上所述,香泽兰总黄酮具有广谱抑菌效果且对大肠埃希菌抑菌活性达到高度敏感。通过口服香泽兰总黄酮可降低大肠埃希菌感染性腹泻小鼠的腹泻率,调节小鼠肠道菌群结构,提高小鼠机体抗体水平,促进TGF-β1 mRNA的表达,促进肠道黏膜修复。结合小鼠腹泻率及体重增长量而言,剂量为160 mg/kg的香泽兰总黄酮效果最好。香泽兰总黄酮抗大肠埃希菌感染性腹泻的可能机理是:香泽兰总黄酮在小鼠肠道内具有直接抑杀大肠埃希菌的效果;香泽兰总黄酮具有改善机体免疫功能,提高血清Ig A和Ig G含量的作用,进而提高机体抵御大肠埃希菌感染的作用;香泽兰总黄酮可促进TGF-β1 mRNA的表达,加快肠道黏膜修复的速度。在香泽兰总黄酮的药效作用下,肠道吸收与分泌功能恢复正常,腹泻得到治愈。
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